1. Bestandteile des Reagenzienkits
| Spezifikationen | 50T | 100T |
| Katze. NEIN. | SN0219 | SN0220 |
| DNA-Extraktionssäulen (Satz) | 50 (Satz) | 100 (Satz) |
| Reagent Buffer B | 20 ml | 2 × 20 ml |
| Reagenzpuffer C | 30 ml | 2 × 30 ml |
| 10×Red Blood Cell Lysis Buffer | 60 ml | 2 × 60ml |
| Waschpuffer 1 | 15 ml | 2 × 15 ml |
| Elutionspuffer | 20 ml | 20 ml |
| Proteinase K | 1ml | 2x1ml |
| RNaseA | 1ml | 2x1ml |
| Bedienungsanleitung | 1 | 1 |
2. Lagerung
Dieses Reagenzienkit sollte bei Raumtemperatur gelagert werden (15-25℃) und bei trockenen Bedingungen, mit einer Haltbarkeit von 12 Monate. Die DNA-Extraktions-Reinigungssäulen können aufbewahrt werden 1 Jahr in einer kühlen und trockenen Umgebung. Proteinase K und RNase A enthalten Konservierungsstoffe, ermöglicht den Transport bei Raumtemperatur, aber zur Langzeitlagerung, Sie sollten bei -20℃ aufbewahrt werden.
3. Anweisungen zur Verwendung des Reagenzienkits
3.1 Dieses Reagenzienkit ist für die molekularbiologische Forschung bestimmt und sollte nicht zur Diagnose oder Behandlung von Krankheiten verwendet werden.
3.2 Einige Komponenten im Reagenzienkit enthalten Reizstoffe. Schutzmaßnahmen wie das Tragen von Schutzkleidung und Schutzbrille werden empfohlen.
3.3 Während der Verwendung dieses Reagenzienkits, eine Hochgeschwindigkeitszentrifuge, Wasserbad (Metallbad), Vortexmixer, Wasserfreies Ethanol, steriles entionisiertes Wasser, und EP-Röhren müssen vom Benutzer vorbereitet werden.
4. Einführung in das Reagenzienkit
The Blood DNA-Reinigung Reagent Kit offers a rapid and effective method for purifying DNA from blood and other bodily fluids. By lysing red blood cells with a red blood cell lysis buffer, DNA can be efficiently collected.
The Blood DNA Rapid Purification Kit can extract total DNA from whole blood (einschließlich Blut, Serum, Plasma, and other bodily fluids) within 30 Protokoll. The entire purification process doesn’t require toxic reagents such as phenol-chloroform. Die extrahierte DNA kann direkt verwendet werden PCR, Southern Blot, und andere Anwendungen.
5. Experimentelle Prinzipien und Verfahren
6. Extraktionsprozess
Vor Beginn des Experiments:
A. Red Blood Cell Lysis Buffer 1x Preparation: Dilute the 10x Red Blood Cell Lysis Buffer to 1x volume using RNase-free water.
B. Reagent Buffer B and Reagent Buffer C may precipitate at low temperatures. Es wird empfohlen, es auf 65℃ zu erhitzen 5 minutes to dissolve the precipitate before use.
C. Prior to using Waschpuffer 1, Geben Sie die angegebene Menge an wasserfreiem Ethanol hinzu, wie auf dem Etikett der Reagenzflasche angegeben, and mark a check on the label to indicate ethanol addition.
D. Elutionspuffer ist ein 0.1x TE-Lösung with minimal EDTA. If EDTA might affect subsequent experiments, it is suggested to substitute Elution Buffer with sterile deionized water.
- Probenhandhabung: (Collect 0.1-5 ml blood samples)
A. Hinzufügen 2-3 times the volume of 1x Red Blood Cell Lysis Bufferto the blood or sample (Dilute the Red Blood Cell Lysis Buffer 10x to 1x before use), mix thoroughly, Zentrifuge bei 12,000 U/min für 1 Minute, carefully remove the supernatant. The precipitate should theoretically be white or pale red. Add Reagent Buffer B to the precipitate (for 0.1-1ml blood samples, hinzufügen 200μLReagent Buffer B; for 1-2ml blood samples, hinzufügen 400μL Reagent Buffer B).
B. If handling samples from low-level organisms like poultry or birds with nucleated red blood cells, a smaller sample volume is needed. In such cases, omit the 1x Red Blood Cell Lysis Buffer and directly add 400μLof Reagent Buffer B and 20μL of RNaseA (10 mg/ml), mix thoroughly, and incubate at room temperature for 5 Protokoll.
2. Hinzufügen 10μLRNaseA (10 mg/ml), 20μL Proteinase K (10 mg/ml), mix thoroughly, digest at 65℃ for 10 Protokoll. During this period, umdrehen und mischen 2-3 times until digestion is complete.
3. Hinzufügen 200μLof Reagent Buffer C to the lysate, mix by pipetting, hinzufügen 200μL of anhydrous ethanol, mix by pipetting.
4. Apply the obtained liquid to the DNA extraction purification column (Satz) (approximately 650~700μl each time), Zentrifuge bei 12,000 U/min für 30 Sekunden, Entsorgen Sie den gesammelten Abfall, and re-insert the collection tube into the DNA extraction purification column (Satz) for the next step.
5. Hinzufügen 700μLof inhibition removal buffer, Zentrifuge bei 12,000 U/min für 30 Sekunden, Entsorgen Sie den Abfall.
6. Platzieren Sie die DNA-Extraktions-Reinigungssäule (Satz) in a new collection tube, hinzufügen 500μLof Wash Buffer 1, Zentrifuge bei 12,000 U/min für 30 Sekunden, Entsorgen Sie den Abfall, and re-insert the DNA extraction purification column (Satz) into the collection tube for the next step.
(Notiz: Ensure anhydrous ethanol has been added to Wash Buffer 1.)
7. Schritt wiederholen 6.
8. Platzieren Sie die DNA-Extraktions-Reinigungssäule (Satz) in ein neues Zentrifugenröhrchen füllen, uncover, incubate at 65℃ in a water bath for 2 Protokoll. Extend this step appropriately to evaporate ethanol as much as possible to prevent ethanol residue from affecting downstream experiments.
9. Suspend 50-100μLof Elution Buffer onto the membrane of the column, Zentrifuge bei 12,000 U/min für 1 Minute, and collect the DNA.
(Notiz: 1. Eluierende DNA mit 50μL of Elution Buffer can increase DNA concentration but reduces total DNA yield; 2. The eluted DNA wash can be reapplied to the DNA extraction purification column. Zentrifuge bei 12,000 U/min für 1 minute again to increase DNA yield.
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