Solarbio Boden-Genom-DNA-Extraktionskit

Inhalt des Kits

Notiz: Einmal geöffnet, Lösung A, B, C, D sollte bei 2-8℃ gehalten werden. PCR Enhancer sollte bei -20 °C aufbewahrt werden.

Produktbeschreibung

• Eignung und Wirksamkeit:
  • Boden Genomische DNA-Extraktion Das Kit ist ideal für die Extraktion mikrobieller DNA aus extremen Bodenumgebungen wie Zimtboden, Dreck, Vulkanasche, usw.
  • Es lysiert effektiv Bakterien und Pilze, Erhaltung der mikrobiellen DNA-Vielfalt.
• Humusentfernung:
  • Nutzt einzigartiges Humus-Adsorptionsmaterial, um verschiedene Humusbestandteile effizient und gezielt zu entfernen.
  • Dieser Prozess beeinträchtigt den Ertrag nicht, und die Reinheit ist im Vergleich zur Phenol-Chloroform-Extraktion deutlich höher.
• DNA-Ausbeute und -Integrität:
  • Die Ausbeuten an extrahierter DNA sind beträchtlich, und die Integrität bleibt gut erhalten.
  • Die extrahierte DNA eignet sich für verschiedene Routineoperationen, einschließlich Enzymverdauung, PCR, Bibliotheksbau, Southern-Blot, usw.

Protokoll

Fügen Sie vor der Verwendung frisch geöffnetes absolutes Ethanol zum Waschpuffer hinzu, Das Volumen basiert auf dem Etikett der Flasche als Referenz. Setzen Sie den Verschluss wieder auf die Flasche und schütteln Sie sie gut. Alle Zentrifugenschritte werden bei Raumtemperatur durchgeführt (15℃-25℃).

1. Methode A: Wiegen Sie eine Bodenprobe von 0,1–0,5 g, Geben Sie Erde in den Mörtel, Gießen Sie die richtige Menge flüssigen Stickstoff ein, sofort mahlen, und dreimal wiederholen. Wenn der Boden zu Pulver wird, 450 ul Lösung A hinzufügen, und 1-2 Minuten lang weiter schütteln, bis der gelöste Stoff vollständig suspendiert ist.

Methode B: Wiegen Sie 0,1–0,5 g Bodenprobe in ein Zentrifugenröhrchen (Es ist besser, 2 ml mit rundem Boden zu verwenden), 450 ul Lösung A hinzufügen, und 1-2 Minuten lang weiter schütteln, bis der gelöste Stoff vollständig suspendiert ist. Notiz: Die Wirkung des Mahlens mit flüssigem Stickstoff ist besser.

2. 50 µl Lösung B hinzufügen, und drehen Sie das Röhrchen mehrmals um, um es vollständig zu vermischen (Schütteln Sie nicht heftig). Bei 65°C im Wasserbad inkubieren 6 Mindest, umkehren, und alles vermischen 2 Mindest.
3. 100 µl Lösung C hinzufügen, und drehen Sie das Röhrchen mehrmals um, um es vollständig zu vermischen (Schütteln Sie nicht heftig). Zentrifuge bei, 12000U/min für 10 Mindest.
4. Überstand in ein neues Zentrifugenröhrchen überführen, Zentrifuge bei, 12000U/min für 10 Mindest.
5. Geben Sie 200 μl Lösung D in die Adsorptionssäule, Den aus Schritt zentrifugierten Überstand hinzufügen 4 zur Adsorptionskolonne, vollständig mit der Pipette mischen. Zentrifuge bei 12000 U/min für 1 Mindest.
6. Filtrat im Sammelröhrchen vollständig mischen, Geben Sie es in die Adsorptionssäule, und bei 12000 U/min zentrifugieren 1 Mindest.
7. Entfernen Sie Abfallflüssigkeit im Sammelröhrchen, Geben Sie 500 μl Waschpuffer in die Adsorptionssäule, und bei 12000 U/min zentrifugieren 10 Mindest.
8. Schritt wiederholen 7 zweimal (insgesamt dreimal waschen).
9. Entfernen Sie Abfallflüssigkeit im Sammelröhrchen, Setzen Sie die Adsorptionssäule wieder in das Sammelröhrchen ein, und bei 12000 U/min zentrifugieren 2 Mindest.
10. Trocknen Sie die Adsorptionssäule bei Raumtemperatur(15℃-25℃) für ein paar Minuten oder bei 50℃ für 1 Minute.
11. Setzen Sie die Adsorptionssäule in ein neues Zentrifugenröhrchen ein, 50-100ul Waschpuffer hinzufügen (Vor Gebrauch auf 65℃ vorheizen), und bei 12000 U/min zentrifugieren 1 Mindest.
12. Filtrat im Zentrifugenröhrchen in die Adsorptionssäule geben, Zentrifuge bei 12000 U/min für 1 Mindest. Die Flüssigkeit im Zentrifugenröhrchen ist eine Extraktionslösung für genomische Boden-DNA.
13. Wenn der PCR-Effekt der DNA nicht gut ist, DNA-Konzentration richtig verdünnen oder hinzufügen 1/10 Volumen des PCR-Enhancers.

Anmerkungen

1. Frische Bodenproben erzielen einen höheren Ertrag. Und es ist besser, sich auf die richtigen Aufbewahrungsbedingungen für verschiedene Proben zu beziehen.
2. Wenn die Lösung Niederschlag zeigt, Für einen Moment im 37℃ warmen Wasserbad wieder auflösen, Niederschlag wird verschwinden, und es hat keinen Einfluss auf die DNA-Extraktion.
3. Bei der Überstandsentnahme, Es sollte vermieden werden, Niederschlag zu nehmen, ansonsten, es blockiert die Absorptionssäule und beeinträchtigt die Reinheit des Produkts.
4. Das Volumen des Elutionspuffers sollte nicht weniger als 50 µl betragen, wenn die Lautstärke zu klein ist, Dies beeinträchtigt die Wiederherstellung. Es wird empfohlen, den mit dem Kit gelieferten Elutionspuffer zu verwenden, Bei Verwendung von Wasser als Elutionspuffer geht ein Teil der DNA verloren. Extrahierte DNA sollte bei -20 °C gelagert werden und wiederholte Einfrier-Auftau-Zyklen vermieden werden, um einen DNA-Abbau zu verhindern.
5. Wenn das Produkt Resthumus enthält, es wird die DNA-Absorption ernsthaft beeinträchtigen, Daher sollte es durch eine Kombination aus Elektrophorese-Detektion und Spektrophotometer identifiziert werden
6. Berühren Sie keine flüssigen Reagenzien, bei versehentlichem Kontakt, Sofort mit viel Wasser abspülen.

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