SENO Spermienproben-DNA-Extraktionskit

1. Bestandteile des Reagenzienkits

2. Lagerung

Dieses Reagenzienkit sollte bei Raumtemperatur gelagert werden (15-25℃) und bei trockenen Bedingungen, mit einer Haltbarkeit von 12 Monate. Die DNA-Extraktions-Reinigungssäulen können aufbewahrt werden 1 Jahr in einer kühlen und trockenen Umgebung. Proteinase K und RNase A enthalten Konservierungsstoffe, ermöglicht den Transport bei Raumtemperatur, aber zur Langzeitlagerung, Sie sollten bei -20℃ aufbewahrt werden.

3. Anweisungen zur Verwendung des Reagenzienkits

3.1 Dieses Reagenzienkit ist für die molekularbiologische Forschung bestimmt und sollte nicht zur Diagnose oder Behandlung von Krankheiten verwendet werden.

3.2 Einige Komponenten im Reagenzienkit enthalten Reizstoffe. Schutzmaßnahmen wie das Tragen von Schutzkleidung und Schutzbrille werden empfohlen.

3.3 Während der Verwendung dieses Reagenzienkits, eine Hochgeschwindigkeitszentrifuge, Wasserbad (Metallbad), Vortexmixer, Wasserfreies Ethanol, steriles entionisiertes Wasser, und EP-Röhren müssen vom Benutzer vorbereitet werden.

4. Einführung in das Reagenzienkit

Die Spermaprobe genomische DNA-Extraktion Das Kit bietet eine schnelle und effiziente Reinigungslösung für die DNA von Spermienproben. Es erreicht Probe DNA-Reinigung effektiv durch ein spezielles Extraktionspuffersystem in Kombination mit spezifischen Nukleinsäure-Reinigungssäulen.

Mit diesem Kit kann die DNA einer Spermienprobe extrahiert werden 30 Protokoll, und der gesamte Reinigungsprozess erfordert keine giftigen Reagenzien wie Phenol-Chloroform. Die extrahierte DNA kann direkt verwendet werden PCR, Southern Blot, und andere Anwendungen.

5. Experimentelle Prinzipien und Verfahren

6. Extraktionsprozess

Vor Beginn des Experiments:

A.Reagenzpuffer SP:Dieser Puffer sollte langfristig in einer Umgebung zwischen 2℃ und 8℃ gelagert werden

B.Reagenzpuffer C kann bei niedrigen Temperaturen ausfallen. Es wird empfohlen, es auf 65℃ zu erhitzen 5 Protokoll. Nachdem sich der Niederschlag aufgelöst hat, es kann normal verwendet werden.

C.Waschpuffer 1: Vor Gebrauch, Geben Sie die angegebene Menge an wasserfreiem Ethanol hinzu, wie auf dem Etikett der Reagenzflasche angegeben. Markieren Sie auf dem Etikett ein Häkchen, um die Zugabe von wasserfreiem Ethanol anzuzeigen.

D. Elutionspuffer ist ein 0.1x TE-Lösung enthält eine minimale Menge EDTA. Ob EDTA einen Einfluss auf nachfolgende Experimente hat, Es wird empfohlen, als Ersatz für den Elutionspuffer steriles entionisiertes Wasser zu verwenden.

1. Probenverarbeitung:

Pipette 200μl aus gefrorenem Sperma, bei 75℃ inkubieren 10 Minuten, bis die Spermaprobe nicht zähflüssig ist. Zentrifuge bei 12000 U/min für 5 Protokoll, Den Überstand so weit wie möglich absaugen, und die Samenzellen setzen sich am Boden des Röhrchens ab.

2. Zum Sediment aus dem vorherigen Schritt hinzufügen: 400μl Reagenzpuffer SP, 20μl Proteinase K (10 mg/ml), 20µl RNaseA (10 mg/ml).Bei 65℃ verdauen 10 Protokoll, umdrehen und mischen 6-7 einige Male während des Aufschlusses, bis die Probe vollständig aufgeschlossen ist.
3. Fügen Sie eine gleiche Menge hinzu Reagenzpuffer C und ein gleiches Volumen wasserfreies Ethanol, und durch Pipettieren gut vermischen.

(Zum Beispiel: Wenn Sie 400 μl Reagenzpuffer IV hinzufügen, Sie müssen etwa 460 μl Reagenzpuffer C und 460 μl wasserfreies Ethanol hinzufügen. Nach Zugabe von Reagenzpuffer C kann sich eine kleine Menge Niederschlag bilden, Dies hat jedoch keinen Einfluss auf nachfolgende Experimente.)

4. Übertragen Sie die erhaltene Flüssigkeit auf eine DNA-Extraktions-Reinigungssäule (Kassette) (jeweils etwa 650–700 μl). Lassen Sie es bei Zimmertemperatur stehen 2 Protokoll, Zentrifuge bei über 8,000 U/min für 1 Minute, Entsorgen Sie die gesammelte Abfallflüssigkeit, und setzen Sie das Sammelröhrchen für den nächsten Schritt wieder in die Reinigungssäule ein.
5. Schritt wiederholen 4, Zugabe der restlichen Flüssigkeit zur DNA-Extraktions-Reinigungssäule (Kassette), Zentrifuge bei über 8,000 U/min für 1 Minute, Entsorgen Sie die Abfallflüssigkeit und das Sammelröhrchen.
6. Platzieren Sie die DNA-Extraktions-Reinigungssäule (Kassette) in das Sammelröhrchen, hinzufügen 300 μl Waschpuffer 1, Zentrifuge bei über 8,000 U/min für 1 Minute, Entsorgen Sie die Abfallflüssigkeit, und platzieren Sie die DNA-Extraktions-Reinigungssäule (Kassette) zurück in die Röhre für den nächsten Schritt.

(Notiz: Bestätigen Sie, dass wasserfreies Ethanol zum Waschpuffer hinzugefügt wurde 1.)

7. Hinzufügen 500μl Waschpuffer 1 zur DNA-Extraktions-Reinigungssäule (Kassette), Zentrifuge bei 14,000 U/min (20,000×g) für 2 Protokoll, Verlängern Sie die Zentrifugationszeit entsprechend, um die Membran gründlicher zu trocknen.
8. Platzieren Sie die DNA-Extraktions-Reinigungssäule (Kassette) in ein neues Zentrifugenröhrchen füllen, Öffne den Deckel, bei 65℃für inkubieren 2 Protokoll. Erweitern Sie diesen Schritt bei Bedarf, um das Ethanol so weit wie möglich zu verdampfen, Verhindert, dass Ethanolrückstände die nachgeschalteten Experimente beeinträchtigen.
9. Drop-suspend 50-100μl Elutionspuffer auf die Membran, Zentrifuge bei 12,000 U/min für 2 Protokoll.

(Notiz: 1. Die Verwendung von 50 μl Elutionspuffer zur Elution von DNA kann die DNA-Konzentration erhöhen, verringert jedoch die Gesamt-DNA-Ausbeute. 2. Die eluierte DNA kann erneut auf die DNA-Extraktions-Reinigungssäule aufgetragen werden, zentrifugiert bei 12,000 U/min für 2 wieder Minuten, um die DNA-Ausbeute zu erhöhen.)