Stool or Soil Genomic DNA Extraction Kit

1. Bestandteile des Reagenzienkits

2. Lagerung

Dieses Reagenzienkit sollte bei Raumtemperatur gelagert werden (15-25℃) und bei trockenen Bedingungen, mit einer Haltbarkeit von 12 Monate. Die DNA-Extraktions-Reinigungssäulen können aufbewahrt werden 1 Jahr in einer kühlen und trockenen Umgebung. Lysozyme, Proteinase K, Und RNase A enthalten Konservierungsstoffe, ermöglicht den Transport bei Raumtemperatur, aber zur Langzeitlagerung, Sie sollten bei -20℃ aufbewahrt werden.

3. Anweisungen zur Verwendung des Reagenzienkits

3.1 Dieses Reagenzienkit ist für die molekularbiologische Forschung bestimmt und sollte nicht zur Diagnose oder Behandlung von Krankheiten verwendet werden.

3.2 Einige Komponenten im Reagenzienkit enthalten Reizstoffe. Schutzmaßnahmen wie das Tragen von Schutzkleidung und Schutzbrille werden empfohlen.

3.3 Während der Verwendung dieses Reagenzienkits, eine Hochgeschwindigkeitszentrifuge, Wasserbad (Metallbad), Vortexmixer, Wasserfreies Ethanol, steriles entionisiertes Wasser, und EP-Röhren müssen vom Benutzer vorbereitet werden.

4. Einführung in das Reagenzienkit

This kit provides a fast and efficient method for purifying microbial genomic DNA from soil, Kot, and vomit samples. It is widely used for microbial DNA extraction from soil, Kot, and vomit.

This kit effectively removes sample impurities and inhibitors, reducing inhibitory reactions in downstream experiments such as PCR. The entire purification process does not require toxic reagents such as phenol-chloroform. The extracted DNA can be directly used for PCR, Southern Blot, und andere Anwendungen.

5. Experimentelle Prinzipien und Verfahren

6. Extraktionsprozess

Vor Beginn des Experiments:

A. Reagent Buffer IV kann bei niedrigen Temperaturen ausfallen. We recommend heating at 65℃for 5 Protokoll. Nachdem sich der Niederschlag aufgelöst hat, es kann normal verwendet werden.

B. Vor Gebrauch, add the specified amount of anhydrous ethanol to Waschpuffer 1 as indicated on the bottle label. Markieren Sie auf dem Etikett ein Häkchen, um die Zugabe von wasserfreiem Ethanol anzuzeigen.

C. Elutionspuffer ist ein 0.1x TE-Lösung containing minimal amounts of EDTA. If EDTA might affect subsequent experiments, it is advisable to substitute Elution Buffer with sterile deionized water.

1. Probenverarbeitung (Inhibitor Removal):

A. Fecal and Vomit Samples: Add approximately 200mg of the sample to be extracted, hinzufügen 1ml of Humic Acid Removal Reagent I, vortex thoroughly for 1-2 Protokoll, Zentrifuge bei 12,000 U/min für 2 Protokoll, Den Überstand verwerfen, hinzufügen 560μl of Buffer IV to the pellet, invert and mix thoroughly, digest at 85℃ for 5 Protokoll, umdrehen und mischen 6-7 times during digestion, then proceed to step 2.

B. Soil Samples: Weigh approximately 0.1g-0.5g of sieved soil, hinzufügen 500μl of Buffer IV and 100μl of Humic Acid Removal Reagent I, invert and mix thoroughly, digest at 85℃ for 5 Protokoll, umdrehen und mischen 6-7 times during digestion, then proceed to step 2.

(Notiz: Humic Acid Removal Reagent I/Humic Acid Removal Reagent II is mainly used for soils with high humic acid content, such as forest soils and sedimentary soils. Hinzufügen 1ml of Humic Acid Removal Reagent I to the sample, vortex, shake for 1-2 Protokoll, Zentrifuge bei 8,000 U/min für 2 Protokoll, Den Überstand verwerfen, dann hinzufügen 1ml of Humic Acid Removal Reagent II, vortex, Zentrifuge bei 8,000 U/min für 2 Protokoll, Den Überstand verwerfen. This step can further reduce soil humic acid inhibitors but significantly reduce DNA yield.)

2. Zentrifuge bei 12,000 U/min für 2 Protokoll, transfer the supernatant to a new centrifuge tube (approximately 500μl liquid transferred), add 20μl Proteinase K (10 mg/ml), 20μl Lysozyme, and 20μl RNase A, and incubate at 65℃ for 2 Protokoll.
3. Fügen Sie eine gleiche Menge hinzu Reagens Buffer C plus (approximately 560μl liquid transferred) to the lysate, gut mischen. If a white precipitate appears, let it settle; it won’t affect subsequent experiments after the precipitate disappears.
4. Add an equal volume of ethanol to Reagens Buffer C plus (z.B., hinzufügen 560μl von Reagens Buffer C plus, then add 560μl of ethanol), gut mischen. There may be precipitation, but it won’t affect subsequent experiments.
5. Add the obtained liquid to the DNA extraction purification column (sleeve) (jeweils etwa 650–700 μl), Zentrifuge bei über 8,000 U/min für 1 Minute, Entsorgen Sie die gesammelte Abfallflüssigkeit, and reinsert the collection tube into the DNA extraction purification column (sleeve) for the next step.
6. Hinzufügen 400μl Inhibitor Removal Buffer, Zentrifuge bei über 8,000 U/min für 1 Minute, Entsorgen Sie die Abfallflüssigkeit, and reinsert the DNA-Reinigung column into the sleeve for the next step.
7. Hinzufügen 500μl Wash Buffer 1 zur DNA-Extraktions-Reinigungssäule (sleeve), Zentrifuge bei 14,000 U/min (20,000×g) für 1 Minute.
8. Hinzufügen 300μl Wash Buffer 1 again to the DNA extraction purification column (sleeve), Zentrifuge bei 14,000 U/min (20,000×g) für 2 Protokoll.
9. Platzieren Sie die DNA-Extraktions-Reinigungssäule (sleeve) in ein neues Zentrifugenröhrchen füllen, Öffne den Deckel, and incubate at 65℃ for 2 Protokoll. This step can be extended if necessary to evaporate ethanol as much as possible to prevent ethanol residue from affecting downstream experiments.
10. Tropfen 100μl Elution Buffer auf die Membran, Zentrifuge bei 12,000 U/min für 2 Protokoll.

(Notiz: 1. Eluting DNA with 50μl Elution Buffer can increase DNA concentration but reduce total DNA yield; 2. Die eluierte DNA kann erneut auf die DNA-Extraktions-Reinigungssäule aufgetragen werden, centrifuged again at 12,000 U/min für 2 Protokoll, and collected to increase DNA yield.)