Mini kit de extracción de ADN genómico de células/animales

1. Componentes del kit de reactivos

2. Almacenamiento

Este kit de reactivos debe almacenarse a temperatura ambiente. (15-25℃) y en condiciones secas, con una vida útil de 12 meses. Las columnas de purificación y extracción de ADN se pueden almacenar durante 1 año en un ambiente fresco y seco. Proteinasa K y ARNasa A contienen conservantes, permitiendo el transporte a temperatura ambiente, pero para almacenamiento a largo plazo, deben mantenerse a -20 ℃.

3. Instrucciones para usar el kit de reactivos

3.1 Este kit de reactivos está destinado a la investigación de biología molecular y no debe utilizarse para el diagnóstico o tratamiento de enfermedades..

3.2 Algunos componentes del kit de reactivos contienen irritantes.. Se recomiendan medidas de protección como el uso de ropa y gafas protectoras..

3.3 Durante el uso de este kit de reactivos, una centrífuga de alta velocidad, baño de agua (baño de metal), mezclador Vortex, etanol anhidro, agua desionizada estéril, y los tubos EP deben ser preparados por el usuario.

4. Introducción al kit de reactivos

El animal/tejido Purificación de ADN El kit ofrece una solución rápida y eficaz para la purificación del ADN de cultivos celulares y tejidos animales., Ampliamente aplicable en tejidos animales y cultivos celulares..

Este kit de purificación rápida de ADN extrae rápidamente el ADN total de animales y células., produciendo ADN directamente utilizable para PCR, transferencia del sur, y aplicaciones similares. El proceso de purificación no requiere agentes tóxicos como el fenol-cloroformo., haciendo que este kit de purificación de ADN sea muy adecuado para otras muestras.

5. Principios y procedimientos experimentales

6. Proceso de extracción

Antes de comenzar el experimento:

A. Tampón reactivo IV tiende a precipitar en condiciones de baja temperatura. Se recomienda calentar a 65 ℃ durante 5 minutos. Después de que la precipitación se disuelva, se puede utilizar normalmente.

B. Antes de usar, agregue la cantidad especificada de etanol anhidro a LavarBuffer 1 como se indica en la etiqueta del frasco de reactivo, y marque una marca en la etiqueta para indicar la adición de etanol anhidro.

C. El tampón de elución es un 0.1x solución TE con contenido mínimo de EDTA. Si el EDTA podría afectar experimentos posteriores, se recomienda reemplazar el tampón de elución con agua desionizada estéril.

1. Manejo de muestras:

A. Tomar cultivo celular, centrifugar en 12,000 rpm para 1 minuto para recolectar células, y aspirar el sobrenadante tanto como sea posible.. Agregue 250 μl de tampón reactivo IV y 10 μl de RNasaA. (10 mg/ml) a las células recolectadas, suspender completamente, e incubar a 65°C durante 10 minutos.

B. Moler el tejido sin exceder 25 mg en un polvo fino usando nitrógeno líquido. Agregue 200 μl de tampón reactivo IV, 20µl de Proteinasa K (10 mg/ml), y 10μl de RNasaA (10 mg/ml) al polvo, agitar bien, e incubar a 65°C durante 30 minutos, agitar la mezcla cuatro veces durante este período.

2. Agregar 200µl de tampón reactivo Cplus al lisado y mezclar bien. Si aparece un precipitado blanco, se puede dejar tranquilo; No afectará a los experimentos posteriores una vez que desaparezca el precipitado..

3. Agregar 200µl de etanol anhidro y mezclar bien. Podrían producirse algunas precipitaciones., pero no afectará los experimentos posteriores..

4. Aplicar el líquido obtenido a la columna de purificación de extracción de ADN. (manga) (aproximadamente 650~700μl cada vez), déjelo reposar a temperatura ambiente durante 2 minutos, centrifugar en 12,000 rpm para 30 segundos, desechar los residuos recogidos, y vuelva a insertar el tubo de recolección en la columna de purificación para el siguiente paso.

5. Coloque la columna de purificación de extracción de ADN. (manga) en una nueva funda de colección, agregar 700µl de LavarBuffer 1, centrifugar en 12,000 rpm para 30 segundos, desechar los residuos, y colocar la columna de purificación de extracción de ADN. (manga) De nuevo en la manga para el siguiente paso..

(Nota: Confirmar la adición de etanol anhidro al tampón de enjuague 1.)

6. Agregar 500µl de LavarBuffer 1 a la columna de purificación de extracción de ADN (manga), centrifugar en 12,000 rpm para 30 segundos, extender el tiempo de centrifugación adecuadamente para garantizar que la membrana esté más seca.

(Nota: El etanol tiene un impacto significativo en experimentos posteriores.; por lo tanto, la sequedad de la membrana es crucial. Después de la centrifugación, asegúrese de que no quede etanol antes de la elución. Deseche los tubos de residuos y recogida después.. Después de enjuagar con Wash Buffer 1, la membrana de la columna de purificación de ADN debe tener un color tenue. Retire con cuidado la columna de purificación de ADN después de la centrifugación., asegurándose de que no toque el tubo de recolección para evitar la contaminación por etanol.)

7. Coloque la columna de purificación de ADN en un tubo de centrífuga nuevo., agregue 100 μl de tampón de elución directamente sobre la membrana, centrifugar en 12,000 rpm para 1 minuto, y recoger el ADN.

(Nota: La elución de ADN con 50 μl de tampón de elución puede aumentar la concentración de ADN, pero disminuye el rendimiento total de ADN.)