Kit de detección de ácido nucleico para identificación del sexo aviar (Método de PCR)

• Artículo No： AN2206001
• Especificación：48t 100t

Introducción del producto：

Este kit puede amplificar fragmentos de ácidos nucleicos específicos de muestras como plumas., sangre, y tejido de varias aves (incluido psitaciformes, columbiformes, galliformes, Ciconiformes, Gruiformes, y algunos anseriformes), usando PCR.

Incluye Master Mix anti-inhibición 2× Taq PCR (con tinte) y otros componentes necesarios para la PCR. Los productos amplificados se pueden someter directamente a electroforesis en gel de agarosa para determinar los resultados..

Contenido del producto：

Condiciones de almacenaje：

Almacenar a -20 ℃, la vida útil es al menos 12 meses

Procesamiento de muestras:

Consulte el kit de extracción rápida de ADN genómico animal. (para análisis de PCR) Manual de instrucciones de SanshiBio (Número de producto: DP202) para procesamiento de muestras. Almacene las muestras procesadas para su uso posterior..

1. Operación experimental：

• Preparación de la muestra (Área de preparación de muestras)
• Extracción de ácido nucleico:
• Siga las instrucciones del “Kit de extracción rápida de ADN genómico animal (para análisis de PCR)” o utilizar cualquier otro kit/método de extracción de ácidos nucleicos adecuado que cumpla los requisitos. Extraer ácidos nucleicos de las muestras procesadas..
• Lo mejor es probar los ácidos nucleicos extraídos lo antes posible.. Mantenlos en hielo, o guárdelos a 4°C o -20°C si no se usan inmediatamente.

2. Preparación del sistema de reacción (Área de adición de muestra)

2.1 Preparación de la mezcla de reacción:

• Calcule el volumen de reactivos necesarios en función del número de muestras..
• La preparación específica es la siguiente.: Pipeta (norte × 7.5 µL de reactivo de prueba C + norte × 10 µL de reactivo de prueba D + norte × 1 µL de reactivo de prueba E) en un tubo de centrífuga limpio. Mezclar bien pipeteando, y alícuota 18 µL en cada pocillo de un 0.2 tubo de PCR de ml (tubo centrífugo). (Si hay muchas muestras, Prepare la mezcla con antelación y guárdela brevemente a 2-8°C.; usar dentro 2 horas.)

2.2 Agregar 2 µL de ácido nucleico de muestra extraída a cada mezcla de reacción, tapar los tubos, registrar los detalles, y llevar el volumen total a 20 µL por reacción. Mezclar bien y centrifugar durante 30 segundos antes de colocarlo en un máquina de PCR para amplificación.

Amplificación por PCR (Área de Amplificación y Análisis de Productos)

Protocolo de PCR:

• Desnaturalización inicial a 94°C para 3 minutos.
• 32 ciclos de: 94°C para 30 segundos (desnaturalización), 50°C para 45 segundos (recocido), 72°C para 50 segundos (extensión).
• Extensión final a 72°C para 8 minutos, luego mantener a 4°C.
• Enfriar bien los productos de amplificación a 4°C. (o rápidamente a -20°C durante aproximadamente 5 minutos) para 15 minutos.

Electroforesis en gel de agarosa(Usando electroforesis en gel de agarosa horizontal como ejemplo)

4.1 Preparando el gel:

Según la cantidad de gel a colar y la concentración del mismo. (1%~1,5%), medir un volumen apropiado de tampón de electroforesis (TAE o TBE, con números de producto DA001 o DA002 respectivamente, o productos equivalentes que cumplan los requisitos), y verterlo en un matraz triangular.

Nota: El tampón de fundición de gel y el tampón de electroforesis deben ser consistentes.

4.2 Pesar con cuidado la agarosa. (Número de producto: DA003, o una marca equivalente), y agregarlo al matraz. Cubrir el matraz con papel pergamino o film sellador y disolver la agarosa calentándola en el microondas.. Calentar hasta hervir, use guantes resistentes al calor, y agitar suavemente el matraz. Repita hasta que la agarosa esté completamente disuelta..

Nota: El proceso de disolución de agarosa debe utilizar múltiples ebullición breves para evitar que la solución se sobrecaliente y se desborde.. Asegúrese de que la agarosa esté completamente disuelta para evitar causar imágenes de electroforesis poco claras..

4.3 Añadir colorante de ácido nucleico (Número de producto: DA004, o una marca equivalente) a la agarosa completamente disuelta.

4.4 Vierta la solución de agarosa en una bandeja de gel e inserte un peine en las posiciones apropiadas.. El espesor del gel debe estar entre 3 a 5 milímetros.

4.5 Deje que el gel se solidifique a temperatura ambiente. (acerca de 30 minutos para 1 hora). Retire con cuidado el peine y coloque el gel en un tanque de electroforesis precargado con tampón de electroforesis..

Electroforesis y carga de muestras.:

4.6 Carga 5 µL de marcador de ADN (Número de producto: DA005, o una marca equivalente) y 10 µL de los productos de amplificación enfriados en los pocillos. Después de cargar todas las muestras, dejar reposar 2 minutos antes de encender la fuente de alimentación. Establecer el voltaje (70-120V) y tiempo de ejecución (20-30 minutos) según las condiciones.

Interpretación de resultados

Determinar los resultados:

• Si aparece una sola banda aproximadamente 700 pb, Se determina que la muestra es masculina..
• Si aparecen dos bandas amplificadas alrededor de 700 pb y 400 pb (o solo aparece una banda amplificada alrededor de 400 pb), Se determina que la muestra es femenina..
• Si no hay bandas visibles, Los genes específicos para la identificación del género de las aves no se detectaron en la muestra.. Se recomienda rehacer la extracción y amplificación del ácido nucleico o contactar al soporte técnico del fabricante para obtener ayuda..

Precauciones：

• Para prevenir la contaminación, el experimento debe estar estrictamente dividido, con aislamiento físico entre diferentes zonas para evitar la contaminación cruzada causada por factores humanos. Use batas de laboratorio y guantes de látex durante el experimento., y utilizar herramientas separadas en diferentes áreas. Se deben cambiar guantes y batas de laboratorio al moverse entre áreas..
• Los reactivos deben descongelarse completamente antes de su uso., pero se deben evitar ciclos repetidos de congelación y descongelación.. Siga estrictamente las instrucciones para la preparación de reactivos y la adición de muestras.. Bancos de trabajo, centrífugas, pipetas, y otros instrumentos deben desinfectarse periódicamente con desinfectantes que contengan cloro, etanol, agentes de descontaminación de ácidos nucleicos, o lámparas UV.
• Una vez completada la reacción de PCR, no abra la tapa inmediatamente. Espere a que se enfríe lo suficiente antes de abrirlo para evitar la contaminación por aerosoles en la mayor medida posible..
• Este kit sólo se utiliza para amplificar genes específicos en algunas aves no paseriformes. (aves de corral), para otros productos relacionados, por favor consulte Sanli Bio. Este producto es solo para uso en investigación científica y no está destinado al diagnóstico clínico ni a otros fines..