Kit de extracción de ADN del genoma bacteriano

• Componentes del kit de reactivos

• Almacenamiento

Este kit de reactivos debe almacenarse a temperatura ambiente. (15-25℃) y en condiciones secas, con una vida útil de 12 meses. Las columnas de purificación y extracción de ADN se pueden almacenar durante 1 año en un ambiente fresco y seco. lisozima, Proteinase K and RNase A contain preservatives, permitiendo el transporte a temperatura ambiente, pero para almacenamiento a largo plazo, deben mantenerse a -20 ℃.

• Instrucciones para usar el kit de reactivos

3.1 Este kit de reactivos está destinado a la investigación de biología molecular y no debe utilizarse para el diagnóstico o tratamiento de enfermedades..

3.2 Algunos componentes del kit de reactivos contienen irritantes.. Se recomiendan medidas de protección como el uso de ropa y gafas protectoras..

3.3 Durante el uso de este kit de reactivos, una centrífuga de alta velocidad, baño de agua (baño de metal), mezclador Vortex, etanol anhidro, agua desionizada estéril, y los tubos EP deben ser preparados por el usuario.

• Introducción al kit de reactivos

This kit provides a rapid and effective purification method for isolating DNA from various bodily fluids and bacterial culture fluids. It utilizes a silicon-based purification column that selectively adsorbs nucleic acids. With specific buffer solutions, bacterial DNA samples can be extracted within 30 minutos. Todo el proceso de purificación no requiere reactivos tóxicos como el fenol-cloroformo.. The extracted DNA can be directly used for downstream experiments like PCR, transferencia del sur, y otros.

• Principios y procedimientos experimentales

• Proceso de extracción

Antes de comenzar el experimento:

1. Reagent Buffer B and C puede precipitar en condiciones de baja temperatura. We recommend heating at 65℃for 5 minutos. After the precipitate dissolves, se puede utilizar normalmente.
2. Antes de usar, agregue la cantidad especificada de etanol anhidro a Tampón de lavado 1as indicated on the bottle label. Mark a check on the label to indicate the addition of anhydrous ethanol.
3. El tampón de elución es un0.1x solución TEcontaining minimal amounts of EDTA. Si el EDTA podría afectar experimentos posteriores, it is advisable to substitute Elution Buffer with sterile deionized water.
4. Manejo de muestras:
5. Take around 1 ml of bacterial culture, centrifugar en 12,000 rpm para 1 minuto, aspirate the supernatant as much as possible, agregar 200μl of Reagent Buffer Bto the bacterial cell solution. Generalmente, residual RNA has minimal impact on downstream experiments. If RNA interference needs to be eliminated, agregar 10μl of RNaseA (10mg/ml) to the mixture, incubate at 37°C for 2 minutes with vortexing during the period.
6. If the sample being processed contains Gram-positive bacteria, agregar 10μl of Lysozyme (10 mg/ml)y 200μl of Reagent Buffer B. Generalmente, residual RNA has minimal impact on downstream experiments. If RNA interference needs to be eliminated, agregar 10μl of RNaseA (10mg/ml) to the mixture, incubate at 37°C for 15-30 minutes with vortexing during the period.
7. Agregar 10µl de Proteinasa K (10 mg/ml), thoroughly invert and mix, digest at 65°C for 2 minutos. Durante este periodo, invert and mix the sample solution 6-7 times until the sample solution becomes clear after digestion.
8. Agregar 200μl of Reagent Buffer Cto the lysate and mix. Si aparece un precipitado blanco, it can be left to settle; No afectará a los experimentos posteriores una vez que desaparezca el precipitado..
9. Agregar 200μl of ethanol, mezclar bien. Some precipitation might occur but won’t affect subsequent experiments.
10. Transfer the obtained liquid into a DNA extraction purification column, leave at room temperature for 2 minutos, centrifugar en 12,000 rpm para 30 segundos. Discard the collected waste and reinsert the collection tube into the purification column for the next step.
11. Agregar 600μl of Wash Buffer 1, centrifugar en 12,000 rpm para 30 segundos, desechar los residuos, and reinsert the DNA extraction purification column into the holder.

(Nota: Ensure ethanol has been added to Wash Buffer 1.)

7. Agregar 500μl of Wash Buffer 1 a la columna de purificación de extracción de ADN, centrifugar en 12,000 rpm para 2 minutos, extending the centrifugation time as needed for a drier membrane.
8. Coloque la columna de purificación de extracción de ADN. (holder) en un nuevo tubo de centrífuga, abierto, y calentar a 65°C durante 2 minutos. Extend this step as necessary to evaporate ethanol, preventing ethanol residues from affecting downstream experiments.
9. Agregar 50-100μl of Elution Bufferonto the column membrane, centrifugar en 12,000 rpm para 2 minutos.

(Nota: 1. Eluir ADN con 50 μl of Elution Buffer can increase DNA concentration but reduce the total DNA yield. 2. The eluted DNA from the eluate can be reapplied to the DNA extraction purification column, centrifuge again at 12,000 rpm para 2 minutes to enhance DNA yield.)