1. Componentes del kit de reactivos
| Especificaciones | 50t | 100t |
| Gato. No. | SN0219 | SN0220 |
| Columnas de extracción de ADN (colocar) | 50 (colocar) | 100 (colocar) |
| Tampón reactivo B | 20 ml | 2 × 20 ml |
| Tampón reactivo C | 30 ml | 2 × 30ml |
| 10×Tampón de lisis de glóbulos rojos | 60 ml | 2 × 60ml |
| Tampón de lavado 1 | 15 ml | 2 × 15 ml |
| Tampón de elución | 20 ml | 20 ml |
| Proteinasa K | 1ml | 2x1ml |
| ARNasaA | 1ml | 2x1ml |
| Manual de instrucciones | 1 | 1 |
2. Almacenamiento
Este kit de reactivos debe almacenarse a temperatura ambiente. (15-25℃) y en condiciones secas, con una vida útil de 12 meses. Las columnas de purificación y extracción de ADN se pueden almacenar durante 1 año en un ambiente fresco y seco. Proteinasa K y ARNasa A contienen conservantes, permitiendo el transporte a temperatura ambiente, pero para almacenamiento a largo plazo, deben mantenerse a -20 ℃.
3. Instrucciones para usar el kit de reactivos
3.1 Este kit de reactivos está destinado a la investigación de biología molecular y no debe utilizarse para el diagnóstico o tratamiento de enfermedades..
3.2 Algunos componentes del kit de reactivos contienen irritantes.. Se recomiendan medidas de protección como el uso de ropa y gafas protectoras..
3.3 Durante el uso de este kit de reactivos, una centrífuga de alta velocidad, baño de agua (baño de metal), mezclador Vortex, etanol anhidro, agua desionizada estéril, y los tubos EP deben ser preparados por el usuario.
4. Introducción al kit de reactivos
la sangre Purificación de ADN El kit de reactivos ofrece un método rápido y eficaz para purificar el ADN de la sangre y otros fluidos corporales.. Lisando los glóbulos rojos con un tampón de lisis de glóbulos rojos, El ADN se puede recolectar eficientemente.
El kit de purificación rápida de ADN en sangre puede extraer ADN total de sangre completa (incluyendo sangre, suero, plasma, y otros fluidos corporales) dentro 30 minutos. Todo el proceso de purificación no requiere reactivos tóxicos como el fenol-cloroformo.. El ADN extraído se puede utilizar directamente para PCR, transferencia del sur, y otras aplicaciones.
5. Principios y procedimientos experimentales
6. Proceso de extracción
Antes de comenzar el experimento:
A. Preparación de tampón de lisis de glóbulos rojos 1x: Diluya el tampón de lisis de glóbulos rojos 10x a un volumen 1x usando agua sin ARNasa.
B. Tampón reactivo B y tampón reactivo C puede precipitar a bajas temperaturas. Se recomienda calentar a 65 ℃ durante 5 minutos para disolver el precipitado antes de su uso.
C. Antes de usar Tampón de lavado 1, agregue la cantidad especificada de etanol anhidro como se indica en la etiqueta de la botella de reactivo, y marque una marca en la etiqueta para indicar la adición de etanol..
D. El tampón de elución es un 0.1x solución TE con un mínimo de EDTA. Si el EDTA podría afectar experimentos posteriores, Se sugiere sustituir el tampón de elución por agua desionizada estéril..
- Manejo de muestras: (Recolectar 0.1-5 ml de muestras de sangre)
A. Agregar 2-3 veces el volumen de 1x Tampón de lisis de glóbulos rojosa la sangre o muestra (Diluya el tampón de lisis de glóbulos rojos de 10 a 1 veces antes de su uso.), mezclar bien, centrifugar en 12,000 rpm para 1 minuto, Retire con cuidado el sobrenadante.. En teoría, el precipitado debería ser blanco o rojo pálido.. Agregue el tampón reactivo B al precipitado. (para muestras de sangre de 0,1-1 ml, agregar 200µLTampón reactivo B; para muestras de sangre de 1-2 ml, agregar 400µL Tampón reactivo B).
B. Si se manipulan muestras de organismos de bajo nivel, como aves de corral o aves con glóbulos rojos nucleados, se necesita un volumen de muestra más pequeño. En tales casos, omita el tampón de lisis de glóbulos rojos 1x y agregue directamente 400µLde tampón reactivo B y 20µL de ARNasaA (10 mg/ml), mezclar bien, e incubar a temperatura ambiente durante 5 minutos.
2. Agregar 10µLARNasaA (10 mg/ml), 20µL Proteinasa K (10 mg/ml), mezclar bien, digerir a 65 ℃ durante 10 minutos. Durante este periodo, invertir y mezclar 2-3 veces hasta que se complete la digestión.
3. Agregar 200µLde tampón reactivo C al lisado, mezclar pipeteando, agregar 200µL de etanol anhidro, mezclar pipeteando.
4. Aplicar el líquido obtenido a la columna de purificación de extracción de ADN. (colocar) (aproximadamente 650~700μl cada vez), centrifugar en 12,000 rpm para 30 segundos, desechar los residuos recogidos, y vuelva a insertar el tubo de recolección en la columna de purificación de extracción de ADN (colocar) para el siguiente paso.
5. Agregar 700µLde tampón de eliminación de inhibición, centrifugar en 12,000 rpm para 30 segundos, desechar los residuos.
6. Coloque la columna de purificación de extracción de ADN. (colocar) en un nuevo tubo de recolección, agregar 500µLde tampón de lavado 1, centrifugar en 12,000 rpm para 30 segundos, desechar los residuos, y vuelva a insertar la columna de purificación de extracción de ADN. (colocar) en el tubo de recolección para el siguiente paso.
(Nota: Asegúrese de que se haya agregado etanol anhidro al tampón de lavado. 1.)
7. Repita el paso 6.
8. Coloque la columna de purificación de extracción de ADN. (colocar) en un nuevo tubo de centrífuga, descubrir, incubar a 65 ℃ en un baño de agua durante 2 minutos. Amplíe este paso adecuadamente para evaporar el etanol tanto como sea posible para evitar que los residuos de etanol afecten los experimentos posteriores..
9. Suspender 50-100µLde tampón de elución sobre la membrana de la columna, centrifugar en 12,000 rpm para 1 minuto, y recoger el ADN.
(Nota: 1. Eluir ADN con 50µL del tampón de elución puede aumentar la concentración de ADN pero reduce el rendimiento total de ADN; 2. El lavado de ADN eluido se puede volver a aplicar a la columna de purificación y extracción de ADN.. Centrifugar en 12,000 rpm para 1 minuto nuevamente para aumentar el rendimiento del ADNd.
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