Circovirus de la paloma (PiCV) Kit de prueba de ácido nucleico

Artículo No：AP2308003 Especificación：24t/48t Almacenamiento：-20℃

Introducción del producto：

Circovirus de la paloma (PiCV) is an immunosuppressive pathogen and is one of the important pathogens causing pigeon squab disease syndrome. It can accelerate replication in proliferating cells and immune system cells, leading to a low lymphocyte ratio, decreased immunity, and damage to the pigeon immune system. This can result in secondary infections by other pathogens. Por lo tanto, early, rápido, and convenient detection of PiCV is crucial for diagnosis, ralentizar la propagación de la enfermedad, y prevenir complicaciones. This test kit is designed based on the conserved sequences in the PiCV gene, with optimized conditions, enabling accurate fluorescent quantitative PCR testing of oral, cloacal swabs, sangre, y otras muestras de tejido de aves. This allows for a quick determination of whether the host is infected with PiCV.

Contenido del producto：

Condiciones de almacenaje：

Almacenar a -20 ℃, la vida útil es al menos 12 meses.

Operación experimental：

1. Preparación de la muestra (Área de preparación de muestras)

1.1 Requisitos de muestra:

– Hisopos orales y cloacales: Tome un hisopo de algodón esterilizado., insértelo en la garganta o cloaca del pájaro, girar tres veces, colóquelo en un tubo de centrífuga, cortar la parte expuesta, cerrar bien la tapa, y etiquetarlo. Las muestras que puedan analizarse rápidamente deben almacenarse entre 2 y 8 °C dentro de un plazo 24 horas, y las muestras que no puedan analizarse rápidamente deben almacenarse a -20°C.

– Sangre pura: Utilice EDTA como anticoagulante., evitar el anticoagulante heparina, usar sangre entera fresca, o almacenar a 2-8°C por no más de 7 días, o almacenar a -20°C por no más de 3 meses, evitando ciclos repetidos de congelación y descongelación.

– Tejido: Tome tejido muscular o de órganos fresco que no exceda los 100 mg., Utilice 200-500 μl de agua estéril para preparar el homogeneizado de tejido., y continuar con la preparación posterior de la muestra.

1.2 Preparación de la muestra:

Consulte la biografía de Sanshi. “Kit de extracción rápida de ADN genómico animal (para análisis por PCR)” manual (Catalogar: DP202), u otros kits/métodos de extracción de ácidos nucleicos que cumplan los requisitos pertinentes, para la extracción de ácidos nucleicos de muestras procesadas. Coloque la muestra de ácido nucleico extraída en una hielera y pruebe lo antes posible.. Almacenar a 4°C por no más de 7 días o a -20°C durante no más de 6 meses.

2. Preparación del sistema de reacción (Área de reacción)

2.1 Saca cada componente del kit., descongelar completamente a temperatura ambiente, centrífuga para 10 segundos, y centrifugar el líquido dentro de la pared del tubo y la tapa del tubo hasta el fondo del tubo.. Prepare la solución de reacción de acuerdo con la cantidad de muestra. (n+2, donde n es el número de muestras, se recomienda configurar 1 control positivo y 1 control negativo para cada experimento). Método de preparación específico: Llevar (n+2) reaction tubes containing PiCV premix solution, agregue 11,5 µl de solución de reacción de PiHV a cada tubo, use una pipeta para mezclar bien, 23µL por pocillo, y guardar en una hielera.

2.2 Luego agregue secuencialmente 2 μL de control negativo., ácido nucleico de muestra extraída, and PiCV positive control to the reaction solution. Cerrar la tapa del tubo, grabar un disco, y el volumen total de cada reacción es 25μL. Mezclar bien, centrífuga para 10 segundos, y realizar experimentos de amplificación en el instrumento de PCR.

3. Amplificación por PCR (Área de Amplificación y Análisis de Productos)

Predesnaturalización a 95°C para 2 minutos; Desnaturalización a 95°C para 10 segundos, recocido y extensión a 60°C para 35 segundos, 40 ciclos. Recoge señales de fluorescencia a 60 °C.. Elija el canal de fluorescencia FAM (Utilice instrumentos de PCR cuantitativa de fluorescencia en tiempo real, como la serie ABI., si necesario, póngase en contacto con el fabricante o agregue tinte corrector ROX; de lo contrario, seguir los procedimientos normales).

4. Interpretación de resultados

4.1 Condiciones para la validez del experimento:

Valor Ct del canal FAM de control positivo < 28 y un “S”-Se observa una curva de amplificación formada.; el control negativo no tiene valor Ct o valor Ct ≥ 38 y no “S”-curva de amplificación en forma, el experimento es valido. De lo contrario, repetir el experimento; si la repetición del experimento aún no es válida, contactar con el personal técnico del fabricante.

4.2 Interpretación de los resultados de las muestras:

Valor CT ≤ 33 y un “S”-shaped amplification curve indicate PiCV positive;

Valor Ct entre 33 < Connecticut < 38 se considera sospechoso, y se recomienda volver a realizar la prueba. Si el valor Ct de nueva prueba del canal FAM es < 33 después de excluir la contaminación por aerosoles y hay una curva de amplificación clara, it is considered PiCV positive, de lo contrario se considera negativo;

Sin valor Ct o valor Ct ≥ 38 y no “S”-shaped amplification curve indicate PiCV negative.

Precauciones：

• Para prevenir la contaminación, el experimento debe estar estrictamente dividido, y se prefiere el aislamiento físico entre particiones para evitar la contaminación cruzada debido a factores humanos. Use batas de laboratorio y guantes de látex durante el experimento., utilizar herramientas de forma independiente en diferentes áreas, cambiarse guantes y batas de laboratorio cuando sea necesario. Después de la PCR, no abra la tapa inmediatamente; Ábralo después de enfriarlo lo suficiente para minimizar la contaminación por aerosoles..
• Descongelar completamente los reactivos antes de su uso., pero evite ciclos repetidos de congelación y descongelación.. Los tubos de reacción de PCR incluidos en el kit son de 0,2 ml.; si es necesario un reemplazo, transferir después de la descongelación completa. Siga estrictamente las instrucciones para la preparación de reactivos y la adición de muestras.. Estaciones de trabajo, centrífugas, pipetas, y otros instrumentos deben desinfectarse periódicamente con desinfectantes que contengan cloro, alcohol, agentes de descontaminación de ácidos nucleicos, o luz ultravioleta.
• Un resultado negativo no significa necesariamente que el huésped no esté infectado con el virus.. Mala calidad de la muestra, baja carga de virus, o la presencia de sustancias inhibidoras fuertes (como el alcohol, desinfectantes, anticoagulantes, etc.) puede resultar en una extracción fallida de ácido nucleico (detección) y un “negativo” resultado. Seguir los criterios de interpretación de resultados., y cuando hay resultados sospechosos, primero excluir la contaminación por aerosoles. Si hay otras preguntas, contactar con el personal técnico del fabricante.
• Este producto es para un solo uso.. Los componentes del reactivo son sensibles a la luz natural.; Evite la exposición a la luz durante el embalaje y almacenamiento.. Después del embalaje, no congelar y descongelar repetidamente. Sólo para uso en investigación científica.; no para diagnóstico clínico u otros fines.