Kit de ensayo de actividad de eliminación de radicales de árboles Solarbio ABTS

Descripción del producto

Contenido del producto:

Asegúrese de que el volumen del reactivo coincida con el volumen de la solución en la botella antes de su uso.. Para consultas, amablemente contacte Solarbio personal con prontitud.

Preparación de la solución:

1. Reactivo II: Antes de usar, agregar 3 mL de agua destilada y disolver completamente. Cualquier reactivo no utilizado se puede almacenar a -20 ℃ durante dos semanas..
2. Preparación de la solución de trabajo del reactivo III: Coloque el líquido en el tubo EP proporcionado.. Prepare la solución de trabajo según la proporción del Reactivo III. (µL) al agua destilada (mililitros) = 1 µL: 12 mililitros. Los reactivos no utilizados deben almacenarse a 4 ℃.
3. Preparación de la solución de trabajo del reactivo IV: Guarde el reactivo IV por separado a -20 ℃. Antes de usar, Prepare la solución de trabajo de acuerdo con el número de muestra y la proporción de Reactivo V a Reactivo I. (V: V) = 1:9. El reactivo no utilizado debe almacenarse a -20 ℃.
4. Reactivo V: Coloque el polvo que contiene 5 mg de vitamina C en el tubo EP suministrado. Agregar 2.8 mL de solución de extracto antes de su uso, y agitar bien para disolver. Prepara un 10 Solución de vitamina C mmol/L para usar como control positivo. Almacenar a 4 ℃ durante una semana..
5. Preparación de la solución de trabajo ABTS.: Antes de usar, Prepare la solución de trabajo ABTS de acuerdo con la cantidad requerida para la prueba.. La proporción de Reactivo I: Reactivo II: Solución de trabajo del reactivo III (V:V:V) = 76:5:4. Prepare y almacene en una habitación oscura a temperatura ambiente.. Usar dentro 30 minutos.

Descripción del Producto:

1. Evaluación de la capacidad antioxidante: El método ABTS se utiliza ampliamente para evaluar la capacidad antioxidante de sustancias hidrófilas y lipófilas..
2. Formación de ABTS Radical: ABTS se oxida para formar un radical ABTS catión azul verdoso estable con picos de absorción en 405 nm o 734 Nuevo Méjico.
3. Disminución de la absorbancia: Cuando la sustancia probada se agrega a la solución de radicales ABTS, el componente antioxidante reacciona con él, causando una disminución en la absorbancia en 405 Nuevo Méjico.
4. Barrido proporcional: El cambio en la absorbancia es directamente proporcional al grado de eliminación de radicales libres dentro de un cierto rango..
5. Cuantificación de la basura: Este kit mide la capacidad de la muestra para eliminar los radicales ABTS cuantificando la disminución de la absorbancia..

Nota: Antes de probar, realizar experimentos preliminares con 2 o 3 muestras que muestren diferencias esperadas significativas. Si la absorbancia de la muestra cae fuera del rango de medición, considerar diluir o aumentar el tamaño de la muestra para la prueba.

Reactivos y equipos necesarios pero no suministrados:

Baño María a temperatura constante, espectrofotómetro, 1 cubeta de vidrio de ml, centrífuga de escritorio, mortero/amoladora, caja de secado, 30~50 tamiz de malla, y agua destilada.

Procedimiento:

I. Extracción de muestras: (El número de muestras se puede ajustar en consecuencia., y consulte la literatura para proporciones específicas)

1. Preparación de muestras de tejido vegetal.: Secar muestras frescas a 60 ℃ hasta peso constante., moler en un mortero (o molinillo), y tamizar a través de un tamiz de malla 30~50. Pesar aproximadamente 0.05 g de muestras, agregar 1 mL de solución de extracto, e incubar en un baño de agua a 40 ℃ durante 30 mín.. Centrifugar en 10000 rpm para 10 min a temperatura ambiente, recoger el sobrenadante y mantenerlo en hielo para realizar pruebas.
2. Vino tinto, Zumo de frutas, y otras muestras líquidas: Llevar 100 μL de solución de muestra y agregar 900 μL de solución de extracto. Mezcla de vórtice, centrifugar a temperatura ambiente, 10000 rpm para 10 mín., recoger el sobrenadante y mantenerlo en hielo para realizar pruebas.
3. Extracción o Droga: Preparar una determinada concentración con la Solución de Extracto., como 5 mg/mL.

Nota: La capacidad de varias muestras para eliminar los radicales libres ABTS puede variar significativamente. Para garantizar la precisión, ajustar las muestras según los resultados preliminares.

II. Pasos de determinación:

1. Precaliente el espectrofotómetro durante más 30 minutos, establezca la longitud de onda en 405 Nuevo Méjico, y cero con agua destilada.
2. Preparación del control positivo: Prepara un 10 Solución de vitamina C mmol/L con solución de extracto. Para una relación lineal, preparar 1, 0.8, 0.6, 0.4, 0.2, y 0.1 Soluciones de vitamina C mg/mL. Para un control positivo con una tasa de eliminación de aproximadamente 90%, Prepare soluciones de vitamina C más grandes que 1.5 mmol/L.
3. Mesa operativa: Agregue los siguientes reactivos a una placa de 96 pocillos o a un tubo EP, respectivamente:

Después de mezclar bien, incubar en la oscuridad durante 6 min a temperatura ambiente. Mida la absorbancia en 405 Nuevo Méjico. Registrar los valores de absorbancia para el tubo en blanco., tubo de control, tubo de control positivo, y tubo de ensayo como AB, C.A., APC, y AT respectivamente. Es necesario probar el tubo vacío. 1-2 veces.

III. Cálculo de la tasa de eliminación de radicales libres ABTS:

1. Establecimiento de la curva estándar: La fórmula para la tasa de eliminación de radicales libres del control positivo.: Tasa de eliminación de radicales libres de ABTS % DVC = [(AB-APC) ÷AB] × 100%
2. Fórmula de cálculo de la tasa de eliminación de radicales libres de muestra: Tasa de eliminación de radicales libres de ABTS D% = [AB – (AT-AC)] ÷AB] × 100%.

Nota:

1. Comparar la capacidad de eliminación de diferentes muestras., se recomienda agregar el mismo volumen de muestras al mismo lote, ajustando según resultados preexperimentales. Durante la comparación, ajustar las muestras según los resultados, comparar tasas de eliminación a la misma concentración (relación de dilución).
2. Las muestras deben tomarse y analizarse el mismo día..

Ejemplo experimental:

Llevar 0.05 g de chile y agregar 1 mL de Solución de Extracto para homogeneizar. Después de la centrifugación, recoger el sobrenadante y proceder según los pasos de determinación. Calcular la tasa de liquidación: %D = [AB – (AT-AC)] ÷ AB] × 100% = [1.330-(0.468-0.022)]÷ 1.330×100% = 66.466%

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