SENO Sperm Sample DNA Extraction Kit

1. Componentes del kit de reactivos

2. Almacenamiento

Este kit de reactivos debe almacenarse a temperatura ambiente. (15-25℃) y en condiciones secas, con una vida útil de 12 meses. Las columnas de purificación y extracción de ADN se pueden almacenar durante 1 año en un ambiente fresco y seco. Proteinasa K y ARNasa A contienen conservantes, permitiendo el transporte a temperatura ambiente, pero para almacenamiento a largo plazo, deben mantenerse a -20 ℃.

3. Instrucciones para usar el kit de reactivos

3.1 Este kit de reactivos está destinado a la investigación de biología molecular y no debe utilizarse para el diagnóstico o tratamiento de enfermedades..

3.2 Algunos componentes del kit de reactivos contienen irritantes.. Se recomiendan medidas de protección como el uso de ropa y gafas protectoras..

3.3 Durante el uso de este kit de reactivos, una centrífuga de alta velocidad, baño de agua (baño de metal), mezclador Vortex, etanol anhidro, agua desionizada estéril, y los tubos EP deben ser preparados por el usuario.

4. Introducción al kit de reactivos

The sperm sample extracción de ADN genómico kit provides a rapid and efficient purification solution for sperm sample DNA. It achieves sample purificación de ADN effectively through a dedicated extraction buffer system combined with specific nucleic acid purification columns.

This kit can extract sperm sample DNA within 30 minutos, and the entire purification process does not require toxic reagents such as phenol-chloroform. El ADN extraído se puede utilizar directamente para PCR, transferencia del sur, y otras aplicaciones.

5. Principios y procedimientos experimentales

6. Proceso de extracción

Antes de comenzar el experimento:

A.Reagent Buffer SP:This buffer should be stored long-term in an environment between 2℃ and 8℃

B.Tampón reactivo C puede precipitar en condiciones de baja temperatura. Se recomienda calentar a 65 ℃ durante 5 minutos. After the precipitate dissolves, se puede utilizar normalmente.

C.Tampón de lavado 1: Antes de usar, agregue la cantidad especificada de etanol anhidro como se indica en la etiqueta de la botella de reactivo. Mark a check on the label to indicate the addition of anhydrous ethanol.

D. El tampón de elución es un 0.1x solución TE containing a minimal amount of EDTA. If EDTA has an impact on subsequent experiments, it is recommended to use sterile deionized water as a substitute for the elution buffer.

1. Procesamiento de muestras:

Pipeta 200µl of frozen sperm, incubate at 75℃ for 10 minutes until the sperm sample is not viscous. Centrifugar en 12000 rpm para 5 minutos, aspirate the supernatant as much as possible, and the sperm cells will sediment at the bottom of the tube.

2. Add to the sediment from the previous step: 400μl Reagent Buffer SP, 20μl Proteinase K (10 mg/ml), 20μl RNaseA (10 mg/ml).Digest at 65℃ for 10 minutos, invertir y mezclar 6-7 times during digestion until the sample is fully digested.
3. Agregue un volumen igual de Tampón reactivo C and an equal volume of anhydrous ethanol, and mix well by pipetting.

(Por ejemplo: If you add 400μl of Reagent Buffer IV, you will need to add approximately 460μl of Reagent Buffer C and 460μl of anhydrous ethanol. A small amount of precipitation may form after adding Reagent Buffer C, but it does not affect subsequent experiments.)

4. Transfer the obtained liquid to a DNA extraction purification column (cassette) (approximately 650-700μl each time). Let it stand at room temperature for 2 minutos, centrifugar a más 8,000 rpm para 1 minuto, discard the collected waste liquid, y vuelva a insertar el tubo de recolección en la columna de purificación para el siguiente paso.
5. Repita el paso 4, adding the remaining liquid to the DNA extraction purification column (cassette), centrifugar a más 8,000 rpm para 1 minuto, discard the waste liquid and the collection tube.
6. Coloque la columna de purificación de extracción de ADN. (cassette) into the collection tube, agregar 300 μl of Wash Buffer 1, centrifugar a más 8,000 rpm para 1 minuto, discard the waste liquid, y colocar la columna de purificación de extracción de ADN. (cassette) back into the tube for the next step.

(Nota: Confirm that anhydrous ethanol has been added to Wash Buffer 1.)

7. Agregar 500μl of Wash Buffer 1 a la columna de purificación de extracción de ADN (cassette), centrifugar en 14,000 rpm (20,000×g) para 2 minutos, extend the centrifugation time appropriately to dry the membrane more thoroughly.
8. Coloque la columna de purificación de extracción de ADN. (cassette) en un nuevo tubo de centrífuga, open the lid, incubate at 65℃for 2 minutos. Extend this step if necessary to evaporate ethanol as much as possible, preventing ethanol residue from affecting downstream experiments.
9. Drop-suspend 50-100μl of Elution Buffer sobre la membrana, centrifugar en 12,000 rpm para 2 minutos.

(Nota: 1. Using 50μl of Elution Buffer to elute DNA can increase DNA concentration but decreases the overall DNA yield. 2. The eluted DNA can be reapplied to the DNA extraction purification column, centrifuged at 12,000 rpm para 2 minutes again, to increase DNA yield.)