Kit de détection d'acide nucléique d'identification du sexe aviaire (Méthode PCR)

• Numéro d'article： AN2206001
• spécification：48T 100T

Présentation du produit：

Ce kit peut amplifier des fragments d'acide nucléique spécifiques provenant d'échantillons tels que des plumes., sang, et tissus de divers oiseaux (y compris Psittaciformes, Columbiformes, Galliformes, Ciconiiformes, Gruiformes, et quelques Ansériformes), en utilisant RAP.

Il comprend un Master Mix anti-inhibition 2× Taq PCR (avec du colorant) et autres composants requis pour la PCR. Les produits amplifiés peuvent être directement soumis à une électrophorèse sur gel d'agarose pour la détermination des résultats.

Contenu du produit：

Conditions de stockage：

Conserver à -20℃, la durée de conservation est d'au moins 12 mois

Traitement des échantillons:

Se référer au kit d'extraction rapide d'ADN génomique animal (pour analyse PCR) Manuel d'instructions de SanshiBio (Numéro de produit: DP202) pour le traitement des échantillons. Conservez les échantillons traités pour une utilisation ultérieure.

1. Opération expérimentale：

• La préparation des échantillons (Zone de préparation des échantillons)
• Extraction d'acide nucléique:
• Suivez les instructions du “Kit d'extraction rapide d'ADN génomique animal (pour analyse PCR)” ou utilisez tout autre kit/méthode d’extraction d’acide nucléique approprié qui répond aux exigences. Extraire les acides nucléiques des échantillons traités.
• Il est préférable de tester les acides nucléiques extraits dès que possible. Gardez-les sur la glace, ou conservez-les à 4°C ou -20°C s'ils ne sont pas utilisés immédiatement.

2. Préparation du système de réaction (Exemple de zone d'ajout)

2.1 Préparation du mélange réactionnel:

• Calculer le volume de réactifs nécessaire en fonction du nombre d'échantillons.
• La préparation spécifique est la suivante: Pipette (n × 7.5 µL de réactif de test C + n × 10 µL de réactif de test D + n × 1 µL de réactif de test E) dans un tube à centrifuger propre. Bien mélanger en pipetant, et aliquote 18 µL dans chaque puits d'un 0.2 Tube PCR en ml (tube à centrifuger). (S'il y a beaucoup d'échantillons, préparer le mélange à l'avance et le conserver brièvement à 2-8°C; utiliser dans 2 heures.)

2.2 Ajouter 2 µL de l’acide nucléique de l’échantillon extrait dans chaque mélange réactionnel, boucher les tubes, enregistrer les détails, et porter le volume total à 20 µL par réaction. Bien mélanger et centrifuger pendant 30 secondes avant de le placer dans un Appareil PCR pour amplifier.

Amplification PCR (Domaine d'amplification et d'analyse de produits)

Protocole PCR:

• Dénaturation initiale à 94°C pour 3 minutes.
• 32 cycles de: 94°C pour 30 secondes (dénaturation), 50°C pour 45 secondes (recuit), 72°C pour 50 secondes (extension).
• Extension finale à 72°C pour 8 minutes, puis maintenir à 4°C.
• Refroidir soigneusement les produits d'amplification à 4°C (ou rapidement à -20°C pendant environ 5 minutes) pour 15 minutes.

Électrophorèse sur gel d'agarose(En utilisant l'électrophorèse horizontale sur gel d'agarose comme exemple)

4.1 Préparation du gel:

Selon la quantité de gel à couler et la concentration du gel (1%~1,5%), mesurer un volume approprié de tampon d'électrophorèse (TAE ou TBE, avec les numéros de produit DA001 ou DA002 respectivement, ou produits équivalents répondant aux exigences), et versez-le dans une fiole triangulaire.

Note: Le tampon de coulée de gel et le tampon d'électrophorèse doivent être cohérents.

4.2 Pesez soigneusement l'agarose (Numéro de produit: DA003, ou une marque équivalente), et ajoutez-le au flacon. Couvrir le flacon de papier sulfurisé ou d'un film scellant et dissoudre l'agarose en le chauffant au micro-ondes. Chauffer jusqu'à ébullition, porter des gants résistants à la chaleur, et faites tourner doucement le flacon. Répétez jusqu’à ce que l’agarose soit complètement dissous.

Note: Le processus de dissolution de l'agarose doit utiliser plusieurs brèves ébullitions pour empêcher la solution de surchauffer et de déborder.. Assurez-vous que l'agarose est complètement dissous pour éviter de provoquer des images d'électrophorèse floues.

4.3 Ajouter un colorant d'acide nucléique (Numéro de produit: DA004, ou une marque équivalente) à l'agarose entièrement dissous.

4.4 Versez la solution d'agarose dans un plateau de coulée de gel et insérez un peigne aux positions appropriées. L'épaisseur du gel doit être comprise entre 3 à 5 mm.

4.5 Laisser le gel se solidifier à température ambiante (à propos 30 minutes pour 1 heure). Retirez délicatement le peigne et placez le gel dans une cuve d'électrophorèse pré-remplie de tampon d'électrophorèse.

Électrophorèse et chargement des échantillons:

4.6 Charger 5 µL de marqueur ADN (Numéro de produit: DA005, ou une marque équivalente) et 10 µL des produits d'amplification refroidis dans les puits. Après avoir chargé tous les échantillons, laisser reposer 2 minutes avant de mettre sous tension. Régler la tension (70-120V) et temps d'exécution (20-30 minutes) selon les conditions.

Interprétation des résultats

Détermination des résultats:

• Si une seule bande apparaît à environ 700 pb, l'échantillon est déterminé comme étant un homme.
• Si deux bandes amplifiées apparaissent vers 700bp et 400bp (ou une seule bande amplifiée apparaît vers 400pb), l'échantillon est déterminé comme étant une femme.
• Si aucune bande n'est visible, les gènes spécifiques à l'identification du genre aviaire n'ont pas été détectés dans l'échantillon. Il est recommandé de refaire l'extraction et l'amplification de l'acide nucléique ou de contacter le support technique du fabricant pour obtenir de l'aide..

Précautions：

• Pour éviter les contaminations, l'expérience doit être strictement cloisonnée, avec isolement physique entre les différentes zones pour éviter la contamination croisée causée par des facteurs humains. Portez des blouses de laboratoire et des gants en latex pendant l'expérience, et utiliser des outils distincts dans différents domaines. Les gants et les blouses de laboratoire doivent être changés lors des déplacements entre les zones..
• Les réactifs doivent être complètement décongelés avant utilisation, mais les cycles répétés de gel-dégel doivent être évités. Suivez strictement les instructions pour la préparation des réactifs et l’ajout des échantillons. Etablis, centrifugeuses, pipettes, et les autres instruments doivent être régulièrement désinfectés à l'aide de désinfectants contenant du chlore, éthanol, agents de décontamination des acides nucléiques, ou lampes UV.
• Une fois la réaction PCR terminée, n'ouvrez pas le couvercle immédiatement. Attendez qu'il refroidisse suffisamment avant de l'ouvrir pour éviter autant que possible la contamination par les aérosols.
• Ce kit est uniquement utilisé pour amplifier des gènes spécifiques chez certains oiseaux non passereaux (la volaille), pour d'autres produits connexes, veuillez consulter Sanli Bio. Ce produit est destiné uniquement à la recherche scientifique et n'est pas destiné au diagnostic clinique ou à d'autres fins..