Kit d'extraction d'ARN total sanguin (Suppression de l'ADN génomique)

1. Composants du kit de réactifs

2. Stockage

Ce kit de réactifs doit être conservé à température ambiante (15-25℃) in a dry environment and can be preserved for 12 mois.

3. Instructions d'utilisation du kit de réactifs

3.1 Ce kit est destiné à des fins de recherche en biologie moléculaire et ne doit pas être utilisé pour le diagnostic ou le traitement de maladies..

3.2 Certains composants du kit contiennent des irritants; il est conseillé de prendre les précautions nécessaires (comme porter des vêtements de protection et des lunettes).

3.3 L'utilisation de ce kit nécessite un équipement supplémentaire tel qu'une centrifugeuse à grande vitesse, bain d'eau (bain en métal), mélangeur de vortex, éthanol anhydre, l'azote liquide, chloroforme, eau déminéralisée stérile, et tubes EP.

4. Introduction au kit de réactifs

The RNA purification kit provides a fast and efficient method for purifying RNA from blood and other fluid tissues. It is suitable for most biological fluids and tissues. This RNA purification kit can be applied to blood samples exceeding 0.5 ml, and through DNA removal technology, the extracted RNA is virtually free of genomic DNA.

The RNA Fast Purification Kit allows for the extraction of total RNA (including nuclear RNA and cytoplasmic RNA) du sang à l'intérieur 2 heures. The purified RNA can be directly used for applications such as RT-RAP, Transfert du Nord, etc.. L'ensemble du processus de purification ne nécessite pas de réactifs toxiques tels que le phénol-chloroforme, making the RNA purification kit well-suited for various other sample types.

5. Principes et procédures expérimentaux

6. Processus d'extraction

Précautions avant de commencer l'expérience:

UN. Avant utilisation, add the specified amount of ethanol to Wash Buffer 1 as indicated on the reagent bottle label, and mark a check on the label to indicate the addition of ethanol.

B.Elution Buffer is a 0.1x TE solution containing a minimal amount of EDTA. Si l'EDTA affecte les expériences ultérieures, it is recommended to use sterile deionized water as a substitute for the Elution Buffer.

1. Traitement des échantillons: Take 200μL of blood into an EP tube, ajouter 80μL of Red Blood Cell Lysis Buffer 10x, and mix thoroughly by pipetting.
2. Ajouter 500μL RNA Extraction Buffer 1 plus, vigorously shake to mix, centrifuge at 12000rpm for 3 minutes.
3. Transfer the supernatant to a Purification de l'ADN column, centrifuge at 12000rpm for 1 minute.
4. Ajouter 250μL of ethanol to the supernatant, pipette and mix, transfer the liquid to the RNA purification column, centrifuge at 12000rpm for 30 secondes, jeter le surnageant.
5. Ajouter 600μL Inhibitor Removal Buffer to the RNA purification column, centrifuge at 12000rpm for 30 secondes, jeter le surnageant.
6. Ajouter 600μL Wash Buffer 1 to the RNA purification column, centrifuge at 12000rpm for 30 secondes, jeter le surnageant.

(Note: Confirm that ethanol has been added to Wash Buffer 1. Ethanol presence significantly affects subsequent experiments. Donc, membrane drying is crucial. Après centrifugation, ensure no ethanol remains before elution, then discard the waste and collection tube. After using Wash Buffer 1, the membrane on the RNA purification column should have a slight color. Après centrifugation, retirer délicatement la colonne de purification d'ARN, ensuring it does not touch the collection tube to prevent ethanol interference.)

7. Répétez l'étape 6.
8. Centrifuge the empty tube at 12000rpm for 2 minutes (to evaporate residual ethanol).
9. Place the RNA purification column in a new centrifuge tube, drip 100μL Elution Buffer onto the membrane, incuber à température ambiante pendant 5 minutes (15℃~25℃), centrifuge at 12000rpm for 1 minute.

(Note: Eluting RNA with 50μL Elution Buffer can increase RNA concentration but reduce total RNA yield.)