Kit d'extraction d'ADN génomique par écouvillon oral

1. Composants du kit de réactifs

2. Stockage

Ce kit de réactifs doit être conservé à température ambiante (15-25℃) et dans des conditions sèches, avec une durée de conservation de 12 mois. Les colonnes de purification par extraction d'ADN peuvent être stockées pendant 1 année dans un environnement frais et sec. Protéinase K et RNase A contiennent des conservateurs, permettant le transport à température ambiante, mais pour un stockage à long terme, ils doivent être conservés à -20℃.

3. Instructions d'utilisation du kit de réactifs

3.1 Ce kit de réactifs est destiné à la recherche en biologie moléculaire et ne doit pas être utilisé pour le diagnostic ou le traitement de maladies..

3.2 Certains composants du kit de réactifs contiennent des irritants. Des mesures de protection telles que le port de vêtements et de lunettes de protection sont recommandées.

3.3 Pendant l'utilisation de ce kit de réactifs, une centrifugeuse à grande vitesse, bain d'eau (bain en métal), mélangeur de vortex, éthanol anhydre, eau déminéralisée stérile, et les tubes EP doivent être préparés par l'utilisateur.

4. Introduction au kit de réactifs

L'écouvillon buccal Purification de l'ADN Le kit fournit une méthode rapide et efficace pour purifier l’ADN des écouvillons oraux, largement utilisé pour l'extraction de cellules épithéliales telles que l'épithélium buccal.

Le kit de purification rapide de l'ADN par écouvillon oral peut extraire l'ADN total des cellules épithéliales buccales à l'intérieur 30 minutes. L'ensemble du processus de purification ne nécessite pas de réactifs toxiques tels que le phénol-chloroforme. L'ADN extrait peut être directement utilisé pour RAP, Southern Blot, et d'autres applications.

5. Principes et procédures expérimentaux

6. Processus d'extraction

Avant de commencer l'expérience:

UN. Tampon réactif B et C peut précipiter dans des conditions de basse température. Nous recommandons de chauffer à 65 ℃ pendant 5 minutes. Après dissolution du précipité, il peut être utilisé normalement.

B. Avant utilisation, ajouter la quantité spécifiée d'éthanol anhydre à Tampon de lavage 1comme indiqué sur l'étiquette du flacon. Cochez l'étiquette pour indiquer l'ajout d'éthanol anhydre..

C. Le tampon d'élution est un0.1x solution TEcontenant des quantités minimales d'EDTA. Si l'EDTA peut affecter les expériences ultérieures, il est conseillé de remplacer le tampon d'élution par de l'eau déionisée stérile.

1. Manipulation des échantillons:
2. Échantillonnage: Prenez un coton-tige stérilisé, insérez-le dans la bouche, frottez contre l'intérieur de la joue d'avant en arrière pendant plus de 20 fois.
3. Utilisez des ciseaux pour couper la tête du coton-tige, placez-le dans un 2 tube à centrifuger ml, et ajouter 400µl de Réactif Tampon B.
4. Ajouter10µl de protéinase K (10 mg/ml) et 10 µl de RNase A (10 mg/ml), retourner complètement, incuber à 65°C pendant 20 minutes, vortex pour 10 secondes pendant l'incubation.
5. Ajouter 400µl de Réactif Tampon Cau lysat, vortexer soigneusement.
6. Ajouter 200μl d'éthanol absolu pré-réfrigéré, bien mélanger; des précipitations peuvent survenir, mais cela n'affectera pas les expériences ultérieures.
7. Transférer le liquide obtenu dans une colonne d’extraction et de purification d’ADN (trousse) (environ 650 ~ 700 μl à chaque fois), centrifuger à >8,000 tr/min pour 1 minute, jeter les déchets liquides collectés, et réinsérez le tube de prélèvement dans la colonne d'extraction et de purification de l'ADN (trousse) pour la prochaine étape.
8. Placer la colonne d'extraction et de purification d'ADN (trousse) dans un tube de collecte, ajouter 300µl de tampon de lavage 1, centrifuger à >8,000 tr/min pour 1 minute, jeter les déchets liquides, et réinsérer la colonne d'extraction et de purification d'ADN (trousse) dans le tube pour la prochaine étape.

(Note: Assurez-vous que de l'éthanol absolu a été ajouté au tampon de lavage. 1.)

7. Ajouter 500µl de tampon de lavage 1à la colonne d'extraction et de purification de l'ADN (trousse), centrifuger à 14,000 tr/min (20,000×g) pour 2 minutes, prolonger le temps de centrifugation de manière appropriée pour sécher davantage la membrane.
8. Placer la colonne d'extraction et de purification d'ADN (trousse) dans un nouveau tube à centrifuger, ouvrir le couvercle, incuber à 65°C pendant 2 minutes; cette étape peut être étendue de manière appropriée pour évaporer l'éthanol autant que possible, empêcher l'éthanol résiduel d'affecter les expériences en aval.
9. Éluer 100µl de tampon d'élutionsur la membrane, centrifuger à 12,000 tr/min pour 2 minutes.

(Note: 1. L'élution de l'ADN avec 50 μl de tampon d'élution peut augmenter la concentration d'ADN mais diminuer le rendement total en ADN.; 2. L'ADN élué dans l'éluat peut être réappliqué à la colonne d'extraction et de purification de l'ADN, centrifuger à nouveau à 12,000 tr/min pour 2 minutes pour augmenter le rendement en ADN.)