Kit d'extraction d'ADN tissulaire inclus en paraffine

1. Composants du kit de réactifs

2. Stockage

Ce kit de réactifs doit être conservé à température ambiante (15-25℃) et dans des conditions sèches, avec une durée de conservation de 12 mois. Les colonnes de purification par extraction d'ADN peuvent être stockées pendant 1 année dans un environnement frais et sec. Protéinase K et RNase A contiennent des conservateurs, permettant le transport à température ambiante, mais pour un stockage à long terme, ils doivent être conservés à -20℃.

3. Instructions d'utilisation du kit de réactifs

3.1 Ce kit de réactifs est destiné à la recherche en biologie moléculaire et ne doit pas être utilisé pour le diagnostic ou le traitement de maladies..

3.2 Certains composants du kit de réactifs contiennent des irritants. Des mesures de protection telles que le port de vêtements et de lunettes de protection sont recommandées.

3.3 Pendant l'utilisation de ce kit de réactifs, une centrifugeuse à grande vitesse, bain d'eau (bain en métal), mélangeur de vortex, éthanol anhydre, eau déminéralisée stérile, et les tubes EP doivent être préparés par l'utilisateur.

4. Introduction au kit de réactifs

Paraffin-embedded tissue Purification de l'ADN kit provides a rapid and effective DNA purification solution for samples in paraffin sections. Tissues are collected after paraffin dissolution using a dedicated dewaxing solution, and sample DNA is obtained through subsequent extraction processes.

This kit can extract sample DNA from paraffin sections within 30 minutes, and the entire purification process does not require toxic reagents such as phenol-chloroform. L'ADN extrait peut être directement utilisé pour RAP, Southern Blot, et d'autres applications.

5. Principes et procédures expérimentaux

6. Processus d'extraction

Avant de commencer l'expérience:

UN. Reagent Buffer FF:This buffer should be stored long-term in an environment between 2°C and 8°C.

B. Reagent Buffers IV and C peut précipiter dans des conditions de basse température. Il est recommandé de chauffer à 65°C pendant 5 minutes. Après dissolution du précipité, the solution can be used normally.

C. LaverTampon 1 should have a specified amount of anhydrous ethanol added before use, as indicated on the reagent bottle label. Check the label with a tick mark to indicate the addition of anhydrous ethanol.

D. Le tampon d'élution est un 0.1x solution TE avec une quantité minimale d'EDTA. Si l'EDTA affecte les expériences ultérieures, it is advisable to replace the elution buffer with sterile deionized water.

1. Traitement des échantillons:

Select 5-10 paraffin sections (1mm-3mm thickness), use scissors to remove excess wax, and cut the embedded tissue sample into small pieces. Place them in a 1.5ml centrifuge tube, ajouter 800μl Reagent Buffer FF, incubate at 75°C for 5 minutes until all paraffin is dissolved. Centrifuge at 12000rpm for 5 minutes, jeter le surnageant.

2. Ajouter 400μl Reagent Buffer IV, 20µl de protéinase K (10 mg/ml), and 10μl RNaseA (10 mg/ml) to the precipitate from the previous step. Digest at 65°C, stirring every 6-7 times until digestion is complete.
3. Ajoutez un volume égal de Tampon réactif Cet an equal volume of anhydrous ethanol, mix thoroughly by pipetting.

(Par exemple: If you add 400μl Reagent Buffer IV, approximately add 430μl Reagent Buffer C and 430μl anhydrous ethanol. Some precipitation may occur after adding Reagent Buffer C, but it does not affect subsequent experiments.)

4. Add the obtained liquid to the DNA extraction purification column (or cartridge) (environ 650-700μl à chaque fois), let it stand at room temperature for 2 minutes, centrifuge at over 8,000rpm for 1 minute. Discard the collected waste and reinsert the collection tube into the purification column for the next step.
5. Répétez l'étape 4, adding the remaining liquid to the DNA extraction purification column (or cartridge), centrifuge at over 8,000rpm for 1 minute, discard the waste and the collection tube.
6. Place the DNA extraction purification column (or cartridge) into the collection tube, ajouter 300µl LaverTampon 1, centrifuge at over 8,000rpm for 1 minute. Discard the waste and reinsert the purification column into the tube for the next step.

(Note: Confirm that anhydrous ethanol has been added to Laver Tampon 1.)

7. Ajouter 500µl LaverTampon 1 to the DNA extraction purification column (or cartridge), centrifuge at 14,000rpm (20000×g) pour 2 minutes. Extend centrifugation time if needed for a dryer membrane.
8. Place the DNA extraction purification column (or cartridge) in a new centrifuge tube, ouvrir le couvercle, incuber à 65°C pendant 2 minutes. Extend this step if necessary to evaporate ethanol to prevent residual ethanol from affecting downstream experiments.
9. Suspend the addition of 50-100µl de tampon d'élution to the membrane, centrifuge at 12,000rpm for 2 minutes.

(Note: 1. Using 50μl Elution Buffer for DNA elution can increase DNA concentration but decreases total DNA yield. 2. The eluted DNA can be reapplied to the DNA extraction purification column, centrifuged at 12000rpm for 2 minutes again to increase DNA yield.)