Ce produit doit être emballé avec des sacs de glace et expédié via FedEx ou UPS.
Il arrivera dans 7-10 jours. Les frais d'expédition sont inclus dans le prix du produit.
Présentation du produit：
Ce kit de réactifs peut amplifier et détecter le gène conservé CHD-W dans des échantillons tels que des plumes., sang, and tissues of parrots, déterminant ainsi leur sexe. En introduisant une référence interne endogène, les processus d'extraction et d'amplification des acides nucléiques peuvent être surveillés pour garantir l'exactitude des résultats des tests.
Contenu du produit：
| Composants réactifs | AN2304001-01（24T） | AN2304001-02（48T） |
| CW reaction solution | 23µL/puits×8puits/bande×3bandes | 23µL/puits × 8 puits/bande × 6 pointes |
| CW Positive control | 100µL | 100µL |
| Contrôle négatif | 100µL | 100µL |
Conditions de stockage：
Conserver à -20℃, la durée de conservation est d'au moins 12 mois
Opération expérimentale：
1. La préparation des échantillons (Zone de préparation des échantillons)
1.1 Exigences relatives aux échantillons：
Plumes: Recueillir au moins 5 plumes de la poitrine, abdomen, ou les jambes (y compris la partie de tige de plume), et n'utilisez pas de plumes naturellement perdues.
Sang: Utiliser l'EDTA comme anticoagulant, ne pas utiliser l'héparine comme anticoagulant. Du sang total frais doit être utilisé, ou il peut être stocké à 2 ~ 8 ℃ jusqu'à 7 jours, ou stocké à -20 ℃ jusqu'à 3 mois. Évitez autant que possible les congélations et décongélations répétées.
Tissu: Prenez du tissu musculaire ou organique frais (éviter d'utiliser des échantillons avec de la peau, tendons, ou fascias difficiles à traiter) de pas plus de 100 mg. Préparer l'homogénat de tissus en utilisant 200 à 500 μL d'eau stérile, puis procéder à la préparation ultérieure des échantillons.
1.2 La préparation des échantillons：
Please refer to the Three Lions Biotech “Kit d'extraction rapide d'ADN génomique animal (pour RAP analyse)” manuel (Numéro d'article: DP202), ou d'autres kits/méthodes d'extraction d'acide nucléique qui répondent aux exigences pertinentes, to extract the processed samples. Placez l'échantillon d'acide nucléique extrait dans une glacière et essayez de procéder au test rapidement.. Il peut être conservé à 4°C jusqu'à 7 jours ou à -20°C jusqu'à 6 mois.
2 . Préparation du système réactionnel (Zone de réaction pour ajouter des échantillons).
2.1 Take out n+2 reaction tubes containing CW positive control, CW negative control, et la solution réactionnelle nécessaire à l'expérience (n représente le nombre d'échantillons à tester, plus 1 contrôle positif, et 1 contrôle négatif). Décongeler complètement les réactifs à température ambiante, centrifugeuse pour 10 secondes, et faites tourner le liquide à l’intérieur des parois et des bouchons du tube jusqu’au fond du tube. Placez-les dans une glacière pour une utilisation ultérieure.
2.2 Alors, ajouter 2μL de contrôle négatif, échantillon d'acide nucléique extrait, and CW positive control to the reaction solution in sequence. Fermez les bouchons des tubes, faire des enregistrements appropriés, et assurez-vous que le volume total de chaque réaction est de 25 μL. Mélangez soigneusement le contenu, centrifugeuse pour 10 secondes, puis procéder à l'expérience d'amplification sur l'instrument PCR.
3. Amplification PCR (Zone d'amplification et d'analyse de produits).
Pré-dénaturation à 95°C pour 3 minutes; Dénaturation à 95°C pour 10 secondes, Annealing and extension at 58°C for 30 secondes, pour 35 cycles, collecting fluorescence signal at 58°C. The fluorescence channel 1 should be set to FAM (CHD-W gene), and channel 2 should be set to VIC/HEX (endogenous reference gene) (when using the ABI series real-time fluorescence quantitative PCR instrument, si nécessaire, contact the manufacturer in advance or add ROX calibration dye by yourself; sinon, suivre la procédure normale).
4. Détermination du résultat
4.1 Si les valeurs Ct du contrôle positif dans le canal FAM et le canal VIC/HEX sont <28 et montre un “S”-courbe d'amplification en forme, et le contrôle négatif n'a pas de valeur Ct ou une valeur Ct ≥35 et aucune “S”-courbe d'amplification en forme, le résultat expérimental est valide. Sinon, l'expérience devrait être répétée, et si la répétition de l'expérience est toujours invalide, veuillez contacter le personnel technique du fabricant.
4.2 La valeur Ct de l'échantillon dans le canal VIC/HEX doit être ≤30 et montrer un “S”-courbe d'amplification en forme, indiquant que l’extraction et l’amplification de l’échantillon sont efficaces. S'il n'y a pas de valeur Ct ou si la valeur Ct est 30 < CT ≤ 35 dans le canal VIC/HEX, cela indique que l'extraction de l'acide nucléique de l'échantillon n'est pas conforme aux normes ou qu'il existe une forte interférence d'inhibition (tels que des résidus d'alcool ou de désinfectants, anticoagulants, etc.) qui inhibe l'amplification. Il est recommandé de retraiter l'échantillon pour l'extraction et l'amplification des acides nucléiques..
4.3 Après que la détection dans le canal VIC/HEX soit valide, la détermination dans le canal FAM est effectuée comme suit:
- Valeur CT ≤ 30 Et un “S”-une courbe d'amplification en forme est observée, and the Ct difference between the two channels is less than 5, il est déterminé comme positif pour le gène CHD-W, indiquant que l'échantillon provient d'une femme.
- Valeur CT ≤ 30 Et un “S”-une courbe d'amplification en forme est observée, but the Ct difference between the two channels is ≥ 5, or Ct value is 30 < CT < 32, tous sont considérés comme suspects, et un nouveau test est recommandé (il est suggéré d'exclure d'abord “faux positif” résultats causés par une contamination environnementale par aérosols, puis procéder à l'extraction et aux tests d'acide nucléique). Si le retest dans le canal FAM après exclusion de la contamination par aérosol montre une valeur Ct < 30 et une courbe d'amplification claire, and the Ct difference between the two channels is less than 5, il est déterminé comme positif pour le gène CHD-W; sinon, il est déterminé comme négatif.
- Aucune valeur Ct ou valeur Ct ≥ 32 et non “S”-courbe d'amplification en forme, il est déterminé comme négatif pour le gène CHD-W, indiquant que l'échantillon peut provenir d'un homme.
Précautions：
1）Pour éviter la contamination, l'expérience doit être menée strictement avec des opérations partitionnées. Il est préférable d'avoir une isolation physique entre les cloisons pour éviter la contamination croisée causée par des facteurs humains. Portez des blouses de laboratoire et des gants en latex pendant l'expérience, et utiliser des outils distincts dans différents domaines. Changer les gants et les blouses de laboratoire au besoin. Après le PCR, n'ouvrez pas les couvercles immédiatement. Attendre un refroidissement suffisant avant d'ouvrir pour l'échantillonnage afin de minimiser la contamination par les aérosols.
2）Décongeler complètement les réactifs avant utilisation, mais évitez les congélations et décongélations répétées. Suivez strictement les instructions pour la préparation des réactifs, ajout d'échantillon, et d'autres étapes. L'établi, centrifuger, pipettes, et les autres instruments doivent être régulièrement désinfectés à l'aide de désinfectants contenant du chlore, éthanol, agents d'élimination de la contamination par les acides nucléiques, ou lampes ultraviolettes.
3）Un résultat négatif ne signifie pas nécessairement un homme. Mutations inconnues, mauvaise qualité de l'échantillon, faible concentration, ou la présence de substances fortement inhibitrices dans l'extraction de l'acide nucléique (essai) peut également conduire à “négatif” résultats. Ce kit est uniquement utilisé pour l'amplification spécifique du gène CHD-W chez le perroquet. Pour d'autres produits, veuillez consulter le fabricant.
4）Ce produit est à usage unique uniquement. Ne pas congeler et décongeler à plusieurs reprises. Il est uniquement destiné à des fins de recherche scientifique et ne doit pas être utilisé à des fins de diagnostic clinique ou à d'autres fins..
