Kit de détection d'acide nucléique de salmonelle

Numéro d'article：AP2308004 Spécification：24T/48T Stockage：-20℃

Présentation du produit：

La salmonelle est une bactérie pathogène alimentaire courante qui peut conduire à la salmonellose, avec des oeufs, la volaille, et la viande étant des sources courantes de transmission. Ce kit de test utilise des méthodes quantitatives fluorescentes en temps réel RAP technologie permettant d'amplifier sélectivement des segments d'ADN spécifiques de Salmonella dans des échantillons tels que l'eau, excréments, et aliments suspectés d'être contaminés. La présence de Salmonella dans l'échantillon peut être déterminée par la valeur Ct, ou le niveau de contamination par Salmonella dans l'échantillon peut être déterminé grâce à une courbe standard.

Contenu du produit：

Conditions de stockage：

Conserver à -20℃, la durée de conservation est d'au moins 12 mois.

Opération expérimentale：

1. La préparation des échantillons (Zone de préparation des échantillons)

1.1 Exemples d'exigences:

– Écouvillonnages oraux et cloacaux: Prenez un coton-tige stérile, insérez-le dans la gorge ou le cloaque de l’oiseau, tourner trois fois, placez-le dans un tube à centrifuger, couper la partie exposée, fermez bien le bouchon, et étiquetez-le. Les échantillons pouvant être testés rapidement doivent être conservés entre 2 et 8 °C dans les 24 heures, et les échantillons qui ne peuvent pas être testés rapidement doivent être conservés à -20 °C..

– Le sang total: Utiliser l'EDTA comme anticoagulant, éviter l'anticoagulant à base d'héparine, utiliser du sang total frais, ou conserver à 2-8°C pendant maximum 7 jours, ou conserver à -20°C pendant maximum 3 mois, éviter les cycles répétés de gel-dégel.

– Tissu: Prendre des tissus musculaires ou organiques frais ne dépassant pas 100 mg, utiliser 200 à 500 μL d'eau stérile pour préparer l'homogénat de tissus, et procéder à la préparation ultérieure des échantillons.

1.2 La préparation des échantillons:

Selon le “FR 4789.4-2016 Norme nationale de sécurité alimentaire – Examen microbiologique des aliments – Test de salmonelle” section 5.1 ou d'autres normes applicables, traiter l'échantillon par pré-enrichissement, et préparer la suspension bactérienne pour une utilisation ultérieure. Peser 25g (ml) de l'échantillon et placez-le dans une tasse d'homogénéisation stérile contenant 225 ml d'eau peptonée tamponnée (BPW). Homogénéiser à 8000rpm/min à 10000rpm/min pendant 1min à 2min ou le placer dans un sachet d'homogénéisation stérile contenant 225mL de BPW et homogénéiser au stomacher pendant 1min à 2min. Si l'échantillon est liquide, l'homogénéisation n'est pas nécessaire; secoue-le bien. Si une mesure du pH est requise, Ajustez le pH à 6,8 ± 0,2 en utilisant 1 mol/mL de NaOH ou HCl stérile. Effectuez des opérations aseptiques pour transférer l'échantillon dans une fiole conique de 500 ml.. Si vous utilisez un sac d'homogénéisation, la culture directe peut être effectuée. Incuber à 36°C±1°C pendant 8h à 18h. Si l'échantillon est un produit congelé, décongeler à des températures inférieures à 45°C pendant 15 minutes maximum ou entre 2°C et 5°C pendant 18 heures maximum. Reportez-vous au Sanshi Biological “ADN total/Kit d'extraction d'ARN Manuel” (Catalogue: DP201) ou d'autres kits/méthodes d'extraction d'acide nucléique qui répondent aux exigences pertinentes pour l'extraction d'acide nucléique à partir d'échantillons traités. Placer les échantillons d'acide nucléique extraits dans une glacière et effectuer la détection dès que possible. Conserver à 4°C maximum 7 jours ou à -20°C pendant pas plus de 6 mois.

2. Préparation du système de réaction (Zone de réaction)

2.1 Sortez chaque composant du kit, décongeler complètement à température ambiante, centrifugeuse pour 10 secondes, et centrifugez le liquide à l'intérieur de la paroi du tube et du capuchon du tube jusqu'au fond du tube. Préparer la solution réactionnelle en fonction de la quantité d'échantillon (n+2, où n est le nombre d'échantillons, il est recommandé de mettre en place 1 contrôle positif et 1 contrôle négatif pour chaque expérience). Méthode de préparation spécifique: Prendre (n+2) tubes de réaction contenant une solution de prémélange Sal, ajouter 11,5 µL de solution de réaction PiHV dans chaque tube, utiliser une pipette pour bien mélanger, 23µL par puits, et conserver au frais.

2.2 Ajoutez ensuite séquentiellement 2 μL de contrôle négatif, échantillon d'acide nucléique extrait, et contrôle positif Sal à la solution réactionnelle. Fermez le bouchon du tube, faire un enregistrement, et le volume total de chaque réaction est de 25μL. Bien mélanger, centrifugeuse pour 10 secondes, et effectuer des expériences d'amplification sur l'instrument PCR.

3. Amplification PCR (Domaine d'amplification et d'analyse de produits)

Pré-dénaturation à 95°C pour 2 minutes; Dénaturation à 95°C pour 10 secondes, recuit et extension à 60°C pour 35 secondes, 40 cycles. Recueillir des signaux de fluorescence à 60°C. Choisissez le canal de fluorescence FAM (utiliser des instruments de PCR quantitative à fluorescence en temps réel tels que la série ABI, si nécessaire, contacter le fabricant ou ajouter du colorant correcteur ROX; sinon, suivre les procédures normales).

4. Interprétation des résultats

4.1 Conditions de validité de l'expérimentation:

Contrôle positif: Valeur Ct dans le canal FAM < 28 et l'apparition d'un “S”-courbe d'amplification en forme. Contrôle négatif: Aucune valeur Ct ou valeur Ct ≥ 40 et non “S”-courbe d'amplification en forme. Les résultats de l'expérience sont valables dans ces conditions; sinon, répéter l'expérience. Si les tests répétés sont toujours invalides, veuillez contacter le personnel technique du fabricant.

4.2 Interprétation des résultats de l'échantillon:

Valeur CT ≤ 35 avec un “S”-la courbe d'amplification en forme est considérée comme positive pour l'acide nucléique de Salmonella. Valeur Ct entre 35 et 40 est considéré comme suspect, et un nouveau test est recommandé. Cela peut être dû à une extraction d’acide nucléique de qualité inférieure ou à la présence de substances fortement inhibitrices. (tels que les désinfectants résiduels, anticoagulants, etc.). Il est suggéré de retraiter l'échantillon pour l'extraction et l'amplification des acides nucléiques.. D'abord, exclure “faux positif” résultats causés par une contamination par aérosol, puis réextraire et tester l'acide nucléique. Si, après exclusion de la contamination par aérosols, le retest du canal FAM montre une valeur Ct < 35 avec une courbe d'amplification claire, c'est considéré comme positif; sinon, c'est considéré comme négatif.

Aucune valeur Ct ou valeur Ct ≥ 40 et non “S”-la courbe d'amplification en forme est considérée comme négative pour l'acide nucléique de Salmonella.

Précautions：

• Pour éviter les contaminations, l'expérience doit être strictement cloisonnée, et l'isolement physique entre les cloisons est préférable pour éviter la contamination croisée due à des facteurs humains. Portez des blouses de laboratoire et des gants en latex pendant l'expérience, utiliser les outils de manière indépendante dans différents domaines, changer de gants et de blouses de laboratoire si nécessaire. Après PCR, n'ouvrez pas le couvercle immédiatement; ouvrez-le après un refroidissement suffisant pour minimiser la contamination par les aérosols.
• Décongeler complètement les réactifs avant utilisation, mais évitez les cycles répétés de gel-dégel. Les tubes de réaction PCR fournis dans le kit font 0,2 ml; si un remplacement est nécessaire, transfert après décongélation complète. Suivez strictement les instructions de préparation des réactifs et d’ajout d’échantillons. Postes de travail, centrifugeuses, pipettes, et les autres instruments doivent être désinfectés régulièrement avec des désinfectants contenant du chlore, alcool, agents de décontamination des acides nucléiques, ou lumière UV.
• Un résultat négatif ne signifie pas nécessairement que l’hôte n’est pas infecté par le virus. Mauvaise qualité des échantillons, faible charge virale, ou la présence de substances fortement inhibitrices (comme l'alcool, désinfectants, anticoagulants, etc.) peut entraîner un échec de l’extraction des acides nucléiques (détection) et un “négatif” résultat. Suivre les critères d'interprétation des résultats, et quand il y a des résultats suspects, exclure d’abord la contamination par aérosols. S'il y a d'autres questions, contacter le personnel technique du fabricant.
• Ce produit est à usage unique. Les composants du réactif sont sensibles à la lumière naturelle; éviter l’exposition à la lumière pendant l’emballage et le stockage. Après emballage, ne pas congeler-dégeler à plusieurs reprises. Pour la recherche scientifique uniquement; pas pour le diagnostic clinique ou à d'autres fins.