Superoxyde Dismutase Solarbio (GAZON) Kit de test d'activité

Superoxyde Dismutase (GAZON) Kit de test d'activité

Note: Il faut prévoir 2-3 échantillons de grande différence avant la détermination formelle.

Équipement d'exploitation: Spectrophotomètre

Chat non: BC0170

Taille: 50T/24S

Composants:

Réactif d'extraction: 60 mL×1. Stockage à 4℃.

Réactif Ⅰ: 15 mL×1. Stockage à 4℃.

Réactif Ⅱ: 160 µL×1. Stockage à 4℃. Mélanger par pipetage après centrifugation.

Réactif Ⅲ: 11 mL×1. Stockage à 4℃.

Réactif Ⅳ: Poudre × 1. Stockage à 4℃.

Réactif V: 2 mL×1. Stockage à 4℃. Ajouter le réactif Ⅳ au réactif V avant utilisation et agiter avec un oscillateur pour bien mélanger.. Il peut être stocké 3 mois.

Description du produit:

Superoxyde dismutase (GAZON, CE 1.15.1.1) est largement trouvé chez les animaux, plantes, micro-organismes et cellules cultivées. Il catalyse l'anion superoxyde pour former H2O2 et O2. La SOD n'est pas seulement l'enzyme qui piége les anions superoxydes, mais aussi la principale enzyme productrice de H2O2, qui joue un rôle important dans le système antioxydant biologique.

Anion superoxyde (O2-) est produit par le système de réaction de la xanthine et de la xanthine oxydase. O2- peut réduire le tétrazole bleu pour créer du formazan bleu, qui a une absorbance dans 560 nm. La SOD peut éliminer l'O2- et inhibe la formation de méthionine. Plus la couleur bleue de la solution réactionnelle est foncée, plus l'activité de la SOD est faible. Plus la couleur bleue de la solution réactionnelle est claire, plus l'activité de la SOD est élevée.

Réactifs et équipements requis mais non fournis:

Spectrophotomètre, centrifugeuse de table, pipette de transfert, 1 Cuvette en verre ml, mortier/homogénéisateur, glace et eau distillée.

Étapes de fonctionnement:

je. La préparation des échantillons:

1. Bactéries ou cellules: collecter des bactéries ou des cellules dans le tube à centrifuger, jeter le surnageant après centrifugation. Selon la proportion de bactéries ou de cellules (104 cellules): volume de la solution d'extraction (ml) de 1:5-10 extraire. Il est suggéré que 5 millions de bactéries ou de cellules avec 1 ml de réactif d'extraction. Diviser les bactéries ou les cellules par ultrasons (placé sur la glace, puissance ultrasonique 200W ou 20%, temps de travail 3s, intervalle 10s, répéter pour 30 fois). Centrifuger à 8000 ×g pour 10 minutes à 4℃ pour éliminer les matières insolubles, et prendre le surnageant sur la glace avant de tester.
2. Tissu: selon la proportion du poids du tissu (g): volume de la solution d'extraction (ml) de 1:5-10 extraire. Il est suggéré que 0.1 g de tissu avec 1 mL de réactif d'extraction et entièrement homogénéisé sur glace.
3. Centrifuger à, 8000 ×g pour 10 minutes à 4℃ pour éliminer les matières insolubles, et prendre le surnageant sur la glace avant de tester.
4. Sérum (plasma) échantillon: détecter l'échantillon directement.

II. Détermination procédure:

1. Préchauffer le spectrophotomètre pendant 30 minutes, ajuster la longueur d'onde à 560 nm et mettre à zéro avec de l'eau distillée.
2. Conserver le réactif Ⅰ, Réactif Ⅲ, Réactif V au bain-marie pendant plus de 5 minutes à 37℃(mammifère) ou

25℃ (autres espèces).

3. Ajoutez des réactifs avec la liste suivante:

Bien mélanger et incuber le mélange à température ambiante pendant 30 minutes. Ajouter le mélange dans une cuvette en verre de 1 ml, et détecter la valeur d'absorbance de chaque tube à 560 nm. ΔAT=AT-AC，ΔAB=AB1-AB2. S'il y a des précipitations au fond, bien mélanger puis mesurer.

III. Calcul:

1. Pourcentage d'inhibition:

Pourcentage d'inhibition =[ΔAB -ΔAT]÷ΔAB× 100%

Le pourcentage d'inhibition doit être compris entre 30 % et 70 % (la valeur proche de 50% aura un résultat plus précis). Si le pourcentage d'inhibition calculé est inférieur à 30% ou plus que 70%, il est généralement nécessaire d'ajuster la quantité d'échantillon ajoutée et de re-déterminer. Si le pourcentage d'inhibition est trop élevé, l'échantillon doit être dilué correctement. Si le pourcentage d'inhibition est trop faible, l'échantillon doit être repréparé avec une concentration plus élevée.

2. Définition de l'unité: Une unité d’activité enzymatique est définie comme la quantité d’enzyme catalysant l’inhibition de 50% dans le système réactionnel de la xanthine ci-dessus
3. Calcul

UN. Sérum (plasma)échantillon

GAZON (U/mL)=[P÷(1-P.)×Vrv]÷Vs×F=11,4×P÷(1-P.)×F

B. Tissu, bactéries ou cellules cultivées

un) Concentration en protéines:

GAZON (Protection U/mL) = [P÷(1-P.)×Vrv]÷(Vs × Cpr)×F=11,4×P÷(1-P.)÷Cpr×F

b) Poids de l'échantillon

GAZON (U/g poids) = [P÷(1-P.)×Vrv]÷(W×Vs÷Vsv)×F=11,4×P÷(1-P.)÷W×F

c) Quantité de bactéries ou de cellules

GAZON (Cellule U/104)=[P÷(1-P.)×Vrv]÷(500×Vs÷Vsv)×F=0,0228×P÷(1-P.)×F

Corde: Volume total de réaction, 1.026 ml; Contre: Volume d'échantillon, 0.09 ml;

Vsv: Volume d'extraction, 1 ml;

Cpr: Concentration de protéines de l'échantillon, mg/ml; W: Poids de l'échantillon, g;

500: Nombre total de bactéries et de cellules, 5 million. P.: Pourcentage d'inhibition, %;

F: Dilution multiple de l'échantillon.

Note:

1. L'échantillon et le réactif Ⅱ doivent être placés sur de la glace lorsque
2. Quand il y a beaucoup d'échantillons, la solution de travail (y compris le réactif I, II et III) peut être configuré selon le tableau. Le réactif V doit être ajouté
3. Une fois la réaction terminée, il peut y avoir des précipitations formées, qui peut être déterminé après

Exemples expérimentaux:

1. 1 g d'Echinochloa crusgalli est ajouté dans 1 mL de réactif d'extraction pour homogénéisation. Après prélèvement du surnageant, l'opération est réalisée selon les étapes de détermination. Les résultats ont montré que ΔAT = AT – CA = 0.335-0.012 = 0.323, ΔAB = AB1 – AB2 = 0.957-0.003 = 0.954. Pourcentage d'inhibition = (ΔAB- ΔAT)÷ ΔAB × 100% = 72%, et l'activité enzymatique est calculée en fonction de la masse de l'échantillon.

Activité de SOD (U/g masse) = 11.4 × Pourcentage d'inhibition (1-Pourcentage d'inhibition) × W = 293.14 U/g masse.

2. 1 mL de réactif d’extraction est ajouté à 0.1 g de rate de rat pour homogénéisation. Après prélèvement du surnageant, l'opération est réalisée selon les étapes de détermination. Les résultats ont montré que ΔAT= AT- CA = 0.563-0.213 = 0.35, ΔAB = AB1- AB2= 0.957-0.003 = 0.954, pourcentage d'inhibition = (ΔAB -ΔAT)÷ΔAB×100% =31%

Activité de SOD (U/g masse) = 11.4 × Pourcentage d'inhibition (1-Pourcentage d'inhibition) ×W = 196.71 U/g masse.

3. 10 millions de cellules sont extraites et centrifugées en ajoutant 1 mL de réactif d'extraction, puis l'opération est effectuée selon les étapes de détermination. Les résultats sont les suivants: ΔAT =AT – CA=614-0,015 = 0.599, ΔAB = AB1- AB2= 0.944-0.005 = 0.939, pourcentage d'inhibition = (ΔAB- ΔAT) ×ΔAB× 100% = 36.21%

Activité de SOD (Cellule U/104) = Pourcentage d'inhibition ÷ (1-Pourcentage d'inhibition)× VTS]÷(1000× VS ÷ VTS) = 0.0065 Cellule U/104.

Les références:

• Spitz D R, Oberley L W. Un test de l'activité de la superoxyde dismutase dans les homogénats de tissus de mammifères[J.]. Biochimie analytique, 1989,179(1):8-18.
• Masayasu M., Hiroshi Y.. Une méthode de dosage simplifiée de l'activité de la superoxyde dismutase à usage clinique[J.]. Clinique Chimique Acta, 1979,92(3):337-342.

Produits connexes:

BC0190/BC0195 Polyphénol Oxydase (OPP) Kit de test d'activité

BC0210/BC0215 Phénylalnine ammonialyase (COPAIN) Kit de test d'activité

BC0200/BC0205 Catalase (CHAT) Kit de test d'activité

BC0090/BC0095 Peroxydase (COSSE) Kit de test d'activité