Kit d’extraction d’ADN génomique de selles ou de sol

1. Composants du kit de réactifs

2. Stockage

Ce kit de réactifs doit être conservé à température ambiante (15-25℃) et dans des conditions sèches, avec une durée de conservation de 12 mois. Les colonnes de purification par extraction d'ADN peuvent être stockées pendant 1 année dans un environnement frais et sec. Lysozyme, Protéinase K, et RNase A contiennent des conservateurs, permettant le transport à température ambiante, mais pour un stockage à long terme, ils doivent être conservés à -20℃.

3. Instructions d'utilisation du kit de réactifs

3.1 Ce kit de réactifs est destiné à la recherche en biologie moléculaire et ne doit pas être utilisé pour le diagnostic ou le traitement de maladies..

3.2 Certains composants du kit de réactifs contiennent des irritants. Des mesures de protection telles que le port de vêtements et de lunettes de protection sont recommandées.

3.3 Pendant l'utilisation de ce kit de réactifs, une centrifugeuse à grande vitesse, bain d'eau (bain en métal), mélangeur de vortex, éthanol anhydre, eau déminéralisée stérile, et les tubes EP doivent être préparés par l'utilisateur.

4. Introduction au kit de réactifs

This kit provides a fast and efficient method for purifying microbial genomic DNA from soil, excréments, and vomit samples. It is widely used for microbial DNA extraction from soil, excréments, and vomit.

This kit effectively removes sample impurities and inhibitors, reducing inhibitory reactions in downstream experiments such as RAP. L'ensemble du processus de purification ne nécessite pas de réactifs toxiques tels que le phénol-chloroforme. The extracted DNA can be directly used for PCR, Southern Blot, et d'autres applications.

5. Principes et procédures expérimentaux

6. Processus d'extraction

Avant de commencer l'expérience:

UN. Reagent Buffer IV peut précipiter dans des conditions de basse température. Nous recommandons de chauffer à 65 ℃ pendant 5 minutes. Après dissolution du précipité, il peut être utilisé normalement.

B. Avant utilisation, ajouter la quantité spécifiée d'éthanol anhydre à Tampon de lavage 1 comme indiqué sur l'étiquette du flacon. Cochez l'étiquette pour indiquer l'ajout d'éthanol anhydre..

C. Le tampon d'élution est un 0.1x solution TE contenant des quantités minimales d'EDTA. Si l'EDTA peut affecter les expériences ultérieures, il est conseillé de remplacer le tampon d'élution par de l'eau déionisée stérile.

1. Traitement des échantillons (Inhibitor Removal):

UN. Fecal and Vomit Samples: Add approximately 200mg of the sample to be extracted, ajouter 1ml of Humic Acid Removal Reagent I, vortex thoroughly for 1-2 minutes, centrifuger à 12,000 tr/min pour 2 minutes, jeter le surnageant, ajouter 560μl of Buffer IV to the pellet, invert and mix thoroughly, digest at 85℃ for 5 minutes, inverser et mélanger 6-7 times during digestion, then proceed to step 2.

B. Soil Samples: Weigh approximately 0.1g-0.5g of sieved soil, ajouter 500μl of Buffer IV and 100μl of Humic Acid Removal Reagent I, invert and mix thoroughly, digest at 85℃ for 5 minutes, inverser et mélanger 6-7 times during digestion, then proceed to step 2.

(Note: Humic Acid Removal Reagent I/Humic Acid Removal Reagent II is mainly used for soils with high humic acid content, such as forest soils and sedimentary soils. Ajouter 1ml of Humic Acid Removal Reagent I to the sample, vortex, shake for 1-2 minutes, centrifuger à 8,000 tr/min pour 2 minutes, jeter le surnageant, puis ajouter 1ml of Humic Acid Removal Reagent II, vortex, centrifuger à 8,000 tr/min pour 2 minutes, jeter le surnageant. This step can further reduce soil humic acid inhibitors but significantly reduce DNA yield.)

2. Centrifuger à 12,000 tr/min pour 2 minutes, transfer the supernatant to a new centrifuge tube (approximately 500μl liquid transferred), add 20μl Proteinase K (10 mg/ml), 20μl Lysozyme, and 20μl RNase A, and incubate at 65℃ for 2 minutes.
3. Ajoutez un volume égal de Réactif Buffer C plus (approximately 560μl liquid transferred) au lysat, bien mélanger. If a white precipitate appears, let it settle; it won’t affect subsequent experiments after the precipitate disappears.
4. Add an equal volume of ethanol to Réactif Buffer C plus (par exemple., ajouter 560µl de Réactif Buffer C plus, then add 560μl of ethanol), bien mélanger. There may be precipitation, but it won’t affect subsequent experiments.
5. Add the obtained liquid to the DNA extraction purification column (sleeve) (environ 650-700μl à chaque fois), centrifuger à plus 8,000 tr/min pour 1 minute, jeter les déchets liquides collectés, and reinsert the collection tube into the DNA extraction purification column (sleeve) pour la prochaine étape.
6. Ajouter 400μl de tampon d'élimination des inhibiteurs, centrifuger à plus 8,000 tr/min pour 1 minute, jeter les déchets liquides, and reinsert the Purification de l'ADN column into the sleeve for the next step.
7. Ajouter 500µl de tampon de lavage 1 to the DNA extraction purification column (sleeve), centrifuger à 14,000 tr/min (20,000×g) pour 1 minute.
8. Ajouter 300µl de tampon de lavage 1 again to the DNA extraction purification column (sleeve), centrifuger à 14,000 tr/min (20,000×g) pour 2 minutes.
9. Place the DNA extraction purification column (sleeve) dans un nouveau tube à centrifuger, ouvrir le couvercle, and incubate at 65℃ for 2 minutes. This step can be extended if necessary to evaporate ethanol as much as possible to prevent ethanol residue from affecting downstream experiments.
10. Goutte 100µl de tampon d'élution sur la membrane, centrifuger à 12,000 tr/min pour 2 minutes.

(Note: 1. Eluting DNA with 50μl Elution Buffer can increase DNA concentration but reduce total DNA yield; 2. The eluted DNA can be reapplied to the DNA extraction purification column, centrifuged again at 12,000 tr/min pour 2 minutes, and collected to increase DNA yield.)