- Composants du kit de réactifs
Caractéristiques | 50T | 100T |
Chat. Non. | SN0341 | SN0342 |
Colonnes d'extraction d'ARN (ensemble) | 50 (ensemble) | 100 (ensemble) |
Humic Acid Removal Reagent I | 50ml | 2x50ml |
Reagent Buffer C Plus | 30 ml | 2x30ml |
Tampon d'élimination des inhibiteurs | 30ml | 2x30ml |
Lysozyme | 1ml | 2x1ml |
Protéinase K | 1ml | 2x1ml |
Tampon de lavage 1 | 15 ml | 2 × 15 ml |
Tampon d'élution | 20 ml | 20 ml |
Manuel d'instructions | 1 | 1 |
- Stockage
Ce kit de réactifs doit être conservé à température ambiante (15-25°C) under dry conditions and can be kept for 12 mois. Lysozyme and Proteinase K contain preservatives, allowing for transportation at room temperature. Pour un stockage à long terme, it should be stored at -20°C.
- Instructions d'utilisation du kit de réactifs
3.1 Ce kit est destiné à des fins de recherche en biologie moléculaire et ne doit pas être utilisé pour le diagnostic ou le traitement de maladies..
3.2 Certains composants du kit contiennent des irritants; il est conseillé de prendre les précautions nécessaires (comme porter des vêtements de protection et des lunettes).
3.3 L'utilisation de ce kit nécessite un équipement supplémentaire tel qu'une centrifugeuse à grande vitesse, bain d'eau (bain en métal), mélangeur de vortex, éthanol anhydre, l'azote liquide, chloroforme, eau déminéralisée stérile, et tubes EP.
- Introduction au kit de réactifs
The Fecal Total RNA Purification Kit provides a fast and efficient method for purifying total RNA from feces and vomit, widely applicable to the extraction of Gram-positive bacteria, Gram-negative bacteria, and viral RNA in feces and vomit samples.
This kit effectively removes impurities and inhibitors from feces and vomit, reducing inhibition in subsequent downstream experiments such as RAP. The extracted RNA can be directly used for PCR, Southern Blot, etc.. L'ensemble du processus de purification ne nécessite pas de réactifs toxiques tels que le phénol-chloroforme, making the RNA purification kit suitable for various other sample types.
- Principes et procédures expérimentaux
- Processus d'extraction
Précautions avant de commencer l'expérience:
UN. Avant usage, ajouter la quantité spécifiée d'éthanol anhydre à LaverTampon 1 as indicated on the reagent bottle label, and mark with a check on the label to indicate the addition of anhydrous ethanol.
B. Le tampon d'élution est un 0.1x solution TE containing a minimal amount of EDTA. If EDTA may affect subsequent experiments, it is recommended to substitute Elution Buffer with sterile deionized water.
- Traitement des échantillons (Inhibitor Removal):
UN: Add approximately 200mg of samples such as feces, add 1ml of Humic Acid Removal Reagent I, vortex thoroughly for 1-2 minutes, centrifuger à 12,000 tr/min pour 2 minutes, and discard the supernatant.
B: If the extracted sample is a virus sample, you can proceed directly to step 2. If the sample contains a high amount of inhibitors, it is recommended to perform the inhibitor removal step first, although it may reduce the yield of viral nucleic acid.
- Sample Lysis:
UN: For extracting nucleic acids from bacterial samples, ajouter 560μl of Buffer C Plus, 20µl de protéinase K, and 20μl Lysozyme to the centrifuge tube from the previous step. Invert and mix thoroughly, digest at 85℃ for 5 minutes, inverting the tube 6-7 times during digestion.
B: For extracting nucleic acids from virus samples, ajouter 560μl of Buffer C Plus and 20μl Proteinase K. Digest at 85℃ for 5 minutes, inverting the tube 6-7 times during digestion.
- Centrifuger à 12,000 tr/min pour 5 minutes, transfer the supernatant to a new centrifuge tube (approximately 500μl liquid transferred).
- Add an equal volume of anhydrous ethanol, bien mélanger. Precipitation may occur, but it does not affect subsequent experiments.
- Transfer the obtained liquid to an RNA purification column (environ 650-700μl à chaque fois), incuber à température ambiante pendant 2 minutes, centrifuger à plus 8,000 tr/min pour 1 minute, jeter les déchets collectés, et réinsérez le tube de prélèvement dans la colonne de purification pour l'étape suivante.
- Place the RNA purification column into a new collection tube, ajouter 400μl of Inhibitor Removal Buffer, centrifuger à plus 8,000 tr/min pour 1 minute, jeter les déchets, and place the nucleic acid purification column back into the tube for the next step.
- Ajouter 500µl de tampon de lavage 1to the RNA purification column, centrifuger à 14,000 tr/min (20,00×g) pour 2 minutes, extending the centrifugation time as needed to ensure membrane drying.
(Note: The presence of ethanol has a serious impact on subsequent experiments, le séchage par membrane est donc crucial. Après centrifugation, s'assurer qu'aucun éthanol n'est présent avant l'élution, then discard the waste and collection tube.)
- Place the RNA purification column into a new centrifuge tube, ajouter 30µl – 50 µl de tampon d'élutionto the membrane, incuber à température ambiante pendant 5 minutes (15℃-25℃), centrifuger à plus 8,000 tr/min pour 1 minute.
(Note: Using 30μl of Elution Buffer to elute RNA can increase RNA concentration but may reduce total RNA yield.)
- Repeat the previous step.
(Note: A new centrifuge tube can be used to collect the RNA eluted in the second wash or continue using the original collection tube to collect RNA.)
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