Kit Deteksi Asam Nukleat Identifikasi Jenis Kelamin Burung (Metode PCR)

• Nomor Barang： AN2206001
• Spesifikasi：48T 100T

Perkenalan produk：

Kit ini dapat memperkuat fragmen asam nukleat tertentu dari sampel seperti bulu, darah, dan jaringan berbagai burung (termasuk Psittaciformes, Kolumbiformes, Galliformes, Ciconiiformes, Gruiformes, dan beberapa Anseriformes), menggunakan PCR.

Ini mencakup Campuran Master PCR 2× Taq anti-penghambatan (dengan pewarna) dan komponen lain yang diperlukan untuk PCR. Produk yang diperkuat dapat langsung dikenai elektroforesis gel agarosa untuk penentuan hasil.

Isi produk：

Kondisi penyimpanan：

Simpan pada suhu -20℃, umur simpan setidaknya 12 bulan

Pemrosesan sampel:

Lihat Kit Ekstraksi Cepat DNA Genomik Hewan (untuk Analisis PCR) Instruksi Manual dari SanshiBio (Nomor produk: DP202) untuk pemrosesan sampel. Simpan sampel yang telah diproses untuk digunakan nanti.

1. Operasi eksperimental：

• Persiapan Sampel (Area Persiapan Sampel)
• Ekstraksi Asam Nukleat:
• Ikuti instruksi dari “Kit Ekstraksi Cepat DNA Genomik Hewan (untuk Analisis PCR)” atau gunakan kit/metode ekstraksi asam nukleat lain yang sesuai dan memenuhi persyaratan. Ekstrak asam nukleat dari sampel yang diproses.
• Yang terbaik adalah menguji asam nukleat yang diekstraksi sesegera mungkin. Simpan di atas es, atau simpan pada suhu 4°C atau -20°C jika tidak segera digunakan.

2. Mempersiapkan Sistem Reaksi (Contoh Area Penambahan)

2.1 Persiapan Campuran Reaksi:

• Hitung volume reagen yang dibutuhkan berdasarkan jumlah sampel.
• Persiapan spesifiknya adalah sebagai berikut: Pipet (n× 7.5 µL Reagen Uji C + n× 10 µL Reagen Uji D + n× 1 µL Reagen Uji E) ke dalam tabung centrifuge yang bersih. Aduk rata dengan memipet, dan alikuot 18 μL ke dalam setiap sumur a 0.2 mL tabung PCR (tabung sentrifugasi). (Jika sampelnya banyak, siapkan campuran terlebih dahulu dan simpan sebentar pada suhu 2-8°C; gunakan di dalam 2 jam.)

2.2 Menambahkan 2 µL asam nukleat sampel yang diekstraksi ke setiap campuran reaksi, tutup tabungnya, mencatat rinciannya, dan jadikan volume totalnya 20 μL per reaksi. Aduk rata dan centrifuge untuk 30 detik sebelum dimasukkan ke dalam a mesin PCR untuk amplifikasi.

Amplifikasi PCR (Area Amplifikasi dan Analisis Produk)

Protokol PCR:

• Denaturasi awal pada suhu 94°C untuk 3 menit.
• 32 siklus dari: 94°C untuk 30 detik (denaturasi), 50°C untuk 45 detik (anil), 72°C untuk 50 detik (perpanjangan).
• Perpanjangan akhir pada 72°C untuk 8 menit, lalu tahan pada suhu 4°C.
• Dinginkan produk amplifikasi secara menyeluruh pada suhu 4°C (atau dengan cepat pada -20°C sekitar 5 menit) untuk 15 menit.

Elektroforesis Gel Agarosa(Menggunakan elektroforesis gel agarosa horizontal sebagai contoh)

4.1 Mempersiapkan Gelnya:

Sesuai dengan jumlah gel yang akan dicetak dan konsentrasi gel (1%~1,5%), mengukur volume buffer elektroforesis yang sesuai (TAE atau TBE, dengan nomor produk DA001 atau DA002 masing-masing, atau produk setara yang memenuhi persyaratan), dan tuangkan ke dalam labu berbentuk segitiga.

Catatan: Buffer pengecoran gel dan buffer elektroforesis harus konsisten.

4.2 Timbang agarosa dengan hati-hati (Nomor produk: DA003, atau merek yang setara), dan menambahkannya ke dalam labu. Tutupi labu dengan kertas roti atau film penyegel dan larutkan agarosa dengan memanaskannya dalam microwave. Panaskan hingga mendidih, memakai sarung tangan tahan panas, dan putar labu dengan lembut. Ulangi sampai agarosa larut sepenuhnya.

Catatan: Proses pelarutan agarosa harus menggunakan beberapa kali perebusan singkat untuk mencegah larutan menjadi terlalu panas dan mendidih. Pastikan agarosa benar-benar larut agar tidak menimbulkan gambar elektroforesis yang tidak jelas.

4.3 Tambahkan pewarna asam nukleat (Nomor produk: DA004, atau merek yang setara) hingga agarosa terlarut sempurna.

4.4 Tuangkan larutan agarosa ke dalam nampan pengecoran gel dan masukkan sisir pada posisi yang sesuai. Ketebalan gel harus berada di antara keduanya 3 ke 5 mm.

4.5 Biarkan gel mengeras pada suhu kamar (tentang 30 menit sampai 1 jam). Keluarkan sisir dengan hati-hati dan masukkan gel ke dalam tangki elektroforesis yang telah diisi dengan buffer elektroforesis.

Elektroforesis dan Pemuatan Sampel:

4.6 Memuat 5 μL Penanda DNA (Nomor produk: DA005, atau merek yang setara) Dan 10 μL produk amplifikasi yang didinginkan ke dalam sumur. Setelah memuat semua sampel, biarkan berdiri 2 menit sebelum menyalakan catu daya. Atur voltase (70-120V) dan waktu berjalan (20-30 menit) sesuai dengan kondisi.

Interpretasi Hasil

Menentukan Hasil:

• Jika satu band muncul kira-kira 700 bp, sampel ditentukan berjenis kelamin laki-laki.
• Jika muncul dua band yang diperkuat sekitar 700bp dan 400bp (atau hanya satu pita yang diperkuat yang muncul sekitar 400bp), sampel ditentukan berjenis kelamin perempuan.
• Jika tidak ada pita yang terlihat, gen spesifik untuk identifikasi jenis kelamin unggas tidak terdeteksi dalam sampel. Disarankan untuk mengulangi ekstraksi dan amplifikasi asam nukleat atau menghubungi dukungan teknis pabrikan untuk mendapatkan bantuan.

Tindakan pencegahan：

• Untuk mencegah kontaminasi, percobaan harus dipartisi secara ketat, dengan isolasi fisik antar zona yang berbeda untuk menghindari kontaminasi silang yang disebabkan oleh faktor manusia. Kenakan jas lab dan sarung tangan lateks selama percobaan, dan menggunakan alat terpisah di area berbeda. Sarung tangan dan jas lab harus diganti saat berpindah antar area.
• Reagen harus dicairkan sepenuhnya sebelum digunakan, namun siklus pembekuan-pencairan yang berulang harus dihindari. Ikuti instruksi secara ketat untuk persiapan reagen dan penambahan sampel. meja kerja, sentrifugal, pipet, dan instrumen lainnya harus didesinfeksi secara teratur menggunakan disinfektan yang mengandung klorin, etanol, agen dekontaminasi asam nukleat, atau lampu UV.
• Setelah reaksi PCR selesai, jangan langsung membuka tutupnya. Tunggu hingga cukup dingin sebelum dibuka untuk menghindari kontaminasi aerosol semaksimal mungkin.
• Kit ini hanya digunakan untuk memperkuat gen tertentu pada beberapa burung non-passerine (unggas), untuk produk terkait lainnya, silakan berkonsultasi dengan Sanli Bio. Produk ini hanya untuk penggunaan penelitian ilmiah dan tidak dimaksudkan untuk diagnosis klinis atau tujuan lainnya.