Adenovirus merpati (PiADV) Kit Deteksi Asam Nukleat

Nomor Barang：AP2308005 Spesifikasi：24T/48T Penyimpanan：-20℃

Perkenalan produk：

• Adenovirus merpati (PiADV) is a common and highly contagious adenovirus that infects birds such as pigeons and parrots, serving as the causative agent of acute infectious diseases, including squab adenitis.
• This virus is highly transmissible, capable of vertical transmission through egg laying, as well as horizontal transmission through direct or indirect contact.
• Currently, there are no specific antiviral drugs for PiADV, making early, cepat, and convenient detection of PiADV crucial for diagnosis, and treatment, memperlambat penyebaran penyakit, dan mencegah komplikasi.
• This detection kit is designed based on the conservative sequences in the PiADV genome, utilizing primers and probes.
• Through system optimization, it enables precise fluorescence quantitative PCR testing of oral cloacal swabs, darah, dan sampel jaringan lain dari burung.
• This facilitates the rapid and accurate determination of PiADV infection in the host.

Isi produk：

Kondisi penyimpanan：

Simpan pada suhu -20℃, umur simpan setidaknya 12 bulan.

Operasi eksperimental：

1. Persiapan Sampel (Area Persiapan Sampel)

1.1 Persyaratan Sampel:

– Usap mulut dan kloaka: Ambil kapas steril, masukkan ke tenggorokan atau kloaka burung, memutar tiga kali, masukkan ke dalam tabung centrifuge, potong bagian yang terbuka, tutup rapat, dan beri label. Sampel yang dapat segera diuji harus disimpan pada suhu 2-8°C 24 jam, dan sampel yang tidak dapat segera diuji harus disimpan pada suhu -20°C.

– Seluruh darah: Gunakan EDTA sebagai antikoagulan, hindari antikoagulan heparin, gunakan darah segar utuh, atau simpan pada suhu 2-8°C tidak lebih dari 7 hari, atau simpan pada suhu -20°C tidak lebih dari 3 bulan, menghindari siklus pembekuan-pencairan yang berulang.

– Jaringan: Ambil otot segar atau jaringan organ tidak melebihi 100mg, gunakan 200-500μL air steril untuk menyiapkan homogenat jaringan, dan melanjutkan dengan persiapan sampel selanjutnya.

1.2 Persiapan Sampel:

Refer to the SanshiBio Bio “Kit Ekstraksi Cepat DNA Genomik Hewan (untuk analisis PCR)” panduan (Katalog: DP202), atau perangkat/metode ekstraksi asam nukleat lainnya yang memenuhi persyaratan yang relevan, untuk ekstraksi asam nukleat dari sampel yang diproses. Tempatkan sampel asam nukleat yang diekstraksi ke dalam pendingin dan uji sesegera mungkin. Simpan pada suhu 4°C tidak lebih dari 7 hari atau pada suhu -20°C tidak lebih dari 6 bulan.

2. Persiapan Sistem Reaksi (Daerah Reaksi)

2.1 Keluarkan setiap komponen kit, benar-benar mencair pada suhu kamar, mesin sentrifugal untuk 10 detik, dan sentrifugasi cairan di dalam dinding tabung dan tutup tabung ke dasar tabung. Siapkan larutan reaksi sesuai dengan jumlah sampel (n+2, dimana n adalah jumlah sampel, disarankan untuk mengaturnya 1 kontrol positif dan 1 kontrol negatif untuk setiap percobaan). Metode persiapan khusus: Mengambil (n+2) reaction tubes containing PiADV premix solution, add 11.5µL of PiADV reaction solution to each tube, gunakan pipet agar tercampur rata, 23μL per sumur, dan simpan di tempat yang lebih dingin.

2.2 Kemudian secara berurutan tambahkan 2μL kontrol negatif, sampel asam nukleat yang diekstraksi, and PiADV positive control to the reaction solution. Tutup tutup tabung, membuat rekor, dan volume total setiap reaksi adalah 25μL. Aduk rata, mesin sentrifugal untuk 10 detik, dan melakukan percobaan amplifikasi pada instrumen PCR.

3. Amplifikasi PCR (Area Amplifikasi dan Analisis Produk)

Pra-denaturasi pada suhu 95°C untuk 2 menit; Denaturasi pada suhu 95°C untuk 10 detik, anil dan ekstensi pada suhu 60°C untuk 35 detik, 40 siklus. Kumpulkan sinyal fluoresensi pada 60°C. Pilih saluran fluoresensi FAM (menggunakan instrumen PCR kuantitatif fluoresensi waktu nyata seperti seri ABI, jika diperlukan, hubungi produsennya atau tambahkan pewarna koreksi ROX; jika tidak, mengikuti prosedur normal).

4. Interpretasi Hasil

4.1 Ketentuan Validitas Eksperimen:

Nilai Ct saluran FAM kontrol positif < 28 dan sebuah “S”-kurva amplifikasi berbentuk diamati; kontrol negatif tidak mempunyai nilai Ct atau nilai Ct ≥ 38 dan tidak “S”-kurva amplifikasi berbentuk, percobaan tersebut valid. Jika tidak, ulangi percobaannya; jika percobaan ulang masih tidak valid, hubungi personel teknis pabrikan.

4.2 Interpretasi Hasil Sampel:

Nilai Ct ≤ 33 dan sebuah “S”-shaped amplification curve indicate PiADV positive;

Nilai Ct antara 33 < Kt < 38 dianggap mencurigakan, dan tes ulang dianjurkan. Jika saluran FAM tes ulang nilai Ctnya < 33 setelah mengecualikan kontaminasi aerosol dan ada kurva amplifikasi yang jelas, it is considered PiADV positive, jika tidak, dianggap negatif;

Tidak ada nilai Ct atau nilai Ct ≥ 38 dan tidak “S”-shaped amplification curve indicate PiADV negative.

Tindakan pencegahan：

• Untuk mencegah kontaminasi, percobaan harus dipartisi secara ketat, dan isolasi fisik antar partisi diutamakan untuk menghindari kontaminasi silang akibat faktor manusia. Kenakan jas lab dan sarung tangan lateks selama percobaan, menggunakan alat secara mandiri di berbagai bidang, mengganti sarung tangan dan jas lab bila diperlukan. Setelah PCR, jangan langsung membuka tutupnya; buka setelah pendinginan yang cukup untuk meminimalkan kontaminasi aerosol.
• Cairkan reagen sepenuhnya sebelum digunakan, tetapi hindari siklus pembekuan-pencairan yang berulang. Tabung reaksi PCR yang disediakan dalam kit berukuran 0,2mL; jika penggantian diperlukan, transfer setelah pencairan lengkap. Ikuti dengan ketat petunjuk untuk persiapan reagen dan penambahan sampel. Stasiun Kerja, sentrifugal, pipet, dan instrumen lainnya harus didesinfeksi secara teratur dengan disinfektan yang mengandung klorin, alkohol, agen dekontaminasi asam nukleat, atau sinar UV.
• Hasil negatif belum tentu berarti inangnya tidak terinfeksi virus. Kualitas sampel buruk, beban virus yang rendah, atau adanya zat penghambat yang kuat (seperti alkohol, desinfektan, antikoagulan, dll.) dapat menyebabkan kegagalan ekstraksi asam nukleat (deteksi) dan sebuah “negatif” hasil. Ikuti kriteria interpretasi hasil, dan ketika ada hasil yang mencurigakan, pertama-tama singkirkan kontaminasi aerosol. Jika ada pertanyaan lain, hubungi personel teknis pabrikan.
• Produk ini hanya untuk sekali pakai. Komponen dalam reagen sensitif terhadap cahaya alami; hindari paparan cahaya selama pengemasan dan penyimpanan. Setelah pengemasan, jangan berulang kali dibekukan-dicairkan. Untuk penggunaan penelitian ilmiah saja; bukan untuk diagnosis klinis atau tujuan lain.