Penyakit Paruh dan Bulu Psittacine (Cps) Alat Uji Asam Nukleat

Nomor Barang：AP2308001 Spesifikasi：24T | 48T | 96T Penyimpanan：-20℃

Perkenalan produk：

Penyakit Paruh dan Bulu Psittacine (Chlamydia psittaci, Cps)” has a round or oval shape with a diameter of approximately 0.3μm. It proliferates in cell vacuoles, forming loosely packed inclusion bodies. Cps is a naturally occurring pathogen that can be transmitted among mammals. Karena itu, lebih awal, cepat, and convenient detection of Cps is crucial for diagnosis, memperlambat penyebaran penyakit, dan mencegah komplikasi. This test kit is designed based on the conserved sequences in the Cps gene, dengan kondisi optimal, memungkinkan kuantitatif fluoresen yang akurat PCR pengujian lisan, penyeka kloaka, darah, dan sampel jaringan lain dari burung. This facilitates the rapid determination of whether the host is infected with Cps.

Isi produk：

Kondisi penyimpanan：

Simpan pada suhu -20℃, umur simpan setidaknya 12 bulan.

Operasi eksperimental：

1. Persiapan Sampel (Area Persiapan Sampel)

1.1 Persyaratan Sampel:

– Usap mulut dan kloaka: Ambil kapas steril, masukkan ke tenggorokan atau kloaka burung, memutar tiga kali, masukkan ke dalam tabung centrifuge, potong bagian yang terbuka, tutup rapat, dan beri label. Sampel yang dapat segera diuji harus disimpan pada suhu 2-8°C 24 jam, dan sampel yang tidak dapat segera diuji harus disimpan pada suhu -20°C.

– Seluruh darah: Gunakan EDTA sebagai antikoagulan, hindari antikoagulan heparin, gunakan darah segar utuh, atau simpan pada suhu 2-8°C tidak lebih dari 7 hari, atau simpan pada suhu -20°C tidak lebih dari 3 bulan, menghindari siklus pembekuan-pencairan yang berulang.

– Jaringan: Ambil otot segar atau jaringan organ tidak melebihi 100mg, gunakan 200-500μL air steril untuk menyiapkan homogenat jaringan, dan melanjutkan dengan persiapan sampel selanjutnya.

1.2 Persiapan Sampel:

Lihat SanshiBio “Kit Ekstraksi Cepat DNA Genomik Hewan (untuk analisis PCR)” panduan (Katalog: DP202), atau perangkat/metode ekstraksi asam nukleat lainnya yang memenuhi persyaratan yang relevan, untuk ekstraksi asam nukleat dari sampel yang diproses. Tempatkan sampel asam nukleat yang diekstraksi ke dalam pendingin dan uji sesegera mungkin. Simpan pada suhu 4°C tidak lebih dari 7 hari atau pada suhu -20°C tidak lebih dari 6 bulan.

2. Persiapan Sistem Reaksi (Daerah Reaksi)

2.1 Keluarkan setiap komponen kit, benar-benar mencair pada suhu kamar, mesin sentrifugal untuk 10 detik, dan sentrifugasi cairan di dalam dinding tabung dan tutup tabung ke dasar tabung. Siapkan larutan reaksi sesuai dengan jumlah sampel (n+2, dimana n adalah jumlah sampel, disarankan untuk mengaturnya 1 kontrol positif dan 1 kontrol negatif untuk setiap percobaan). Metode persiapan khusus: Mengambil (n+2) reaction tubes containing Cps premix solution, add 11.5µL of Cps reaction solution to each tube, gunakan pipet agar tercampur rata, 23μL per sumur, dan simpan di tempat yang lebih dingin.

2.2 Kemudian secara berurutan tambahkan 2μL kontrol negatif, sampel asam nukleat yang diekstraksi, and Cps positive control to the reaction solution. Tutup tutup tabung, membuat rekor, dan volume total setiap reaksi adalah 25μL. Aduk rata, mesin sentrifugal untuk 10 detik, dan melakukan percobaan amplifikasi pada instrumen PCR.

3. Amplifikasi PCR (Area Amplifikasi dan Analisis Produk)

Pra-denaturasi pada suhu 95°C untuk 2 menit; Denaturasi pada suhu 95°C untuk 10 detik, anil dan ekstensi pada suhu 60°C untuk 35 detik, 40 siklus. Kumpulkan sinyal fluoresensi pada 60°C. Pilih saluran fluoresensi FAM (menggunakan instrumen PCR kuantitatif fluoresensi waktu nyata seperti seri ABI, jika diperlukan, hubungi produsennya atau tambahkan pewarna koreksi ROX; jika tidak, mengikuti prosedur normal).

4. Interpretasi Hasil

4.1 Ketentuan Validitas Eksperimen:

Nilai Ct saluran FAM kontrol positif < 28 dan sebuah “S”-kurva amplifikasi berbentuk diamati; kontrol negatif tidak mempunyai nilai Ct atau nilai Ct ≥ 38 dan tidak “S”-kurva amplifikasi berbentuk, percobaan tersebut valid. Jika tidak, ulangi percobaannya; jika percobaan ulang masih tidak valid, hubungi personel teknis pabrikan.

4.2 Interpretasi Hasil Sampel:

Nilai Ct ≤ 33 dan sebuah “S”-shaped amplification curve indicates Cps positive;

Nilai Ct antara 33 < Kt < 38 dianggap mencurigakan, dan tes ulang dianjurkan. Jika saluran FAM tes ulang nilai Ctnya < 33 setelah mengecualikan kontaminasi aerosol dan ada kurva amplifikasi yang jelas, it is considered Cps positive, jika tidak, dianggap negatif;

Tidak ada nilai Ct atau nilai Ct ≥ 38 dan tidak “S”-shaped amplification curve indicate Cps negative.

Tindakan pencegahan：

• Untuk mencegah kontaminasi, percobaan harus dipartisi secara ketat, dan isolasi fisik antar partisi diutamakan untuk menghindari kontaminasi silang akibat faktor manusia. Kenakan jas lab dan sarung tangan lateks selama percobaan, menggunakan alat secara mandiri di berbagai bidang, and change gloves and lab coats when needed. Setelah PCR, jangan langsung membuka tutupnya; buka setelah pendinginan yang cukup untuk meminimalkan kontaminasi aerosol.
• Cairkan reagen sepenuhnya sebelum digunakan, tetapi hindari siklus pembekuan-pencairan yang berulang. Tabung reaksi PCR yang disediakan dalam kit berukuran 0,2mL; jika penggantian diperlukan, transfer setelah pencairan lengkap. Ikuti dengan ketat petunjuk untuk persiapan reagen dan penambahan sampel. Stasiun Kerja, sentrifugal, pipet, dan instrumen lainnya harus didesinfeksi secara teratur dengan disinfektan yang mengandung klorin, alkohol, agen dekontaminasi asam nukleat, atau sinar UV.
• Hasil negatif belum tentu berarti inangnya tidak terinfeksi virus. Kualitas sampel buruk, beban virus yang rendah, atau adanya zat penghambat yang kuat (seperti alkohol, desinfektan, antikoagulan, dll.) dapat menyebabkan kegagalan ekstraksi asam nukleat (deteksi) dan sebuah “negatif” hasil. Ikuti kriteria interpretasi hasil, dan ketika ada hasil yang mencurigakan, pertama-tama singkirkan kontaminasi aerosol. Jika ada pertanyaan lain, hubungi personel teknis pabrikan.
• Produk ini hanya untuk sekali pakai. Komponen dalam reagen sensitif terhadap cahaya alami; hindari paparan cahaya selama pengemasan dan penyimpanan. Setelah pengemasan, jangan berulang kali dibekukan-dicairkan. Untuk penggunaan penelitian ilmiah saja; bukan untuk diagnosis klinis atau tujuan lain.