Kit Deteksi Asam Nukleat Salmonella

Nomor Barang：AP2308004 Spesifikasi：24T/48T Penyimpanan：-20℃

Perkenalan produk：

Salmonella adalah bakteri patogen bawaan makanan yang dapat menyebabkan salmonellosis, dengan telur, unggas, dan daging menjadi sumber penularan yang umum. Alat tes ini menggunakan kuantitatif fluoresen waktu nyata PCR teknologi untuk secara selektif memperkuat segmen DNA spesifik Salmonella dalam sampel seperti air, kotoran, dan dugaan makanan terkontaminasi. Adanya Salmonella pada sampel dapat ditentukan dengan nilai Ct, atau tingkat kontaminasi Salmonella dalam sampel dapat ditentukan melalui kurva standar.

Isi produk：

Kondisi penyimpanan：

Simpan pada suhu -20℃, umur simpan setidaknya 12 bulan.

Operasi eksperimental：

1. Persiapan Sampel (Area Persiapan Sampel)

1.1 Persyaratan Sampel:

– Usap mulut dan kloaka: Ambil kapas steril, masukkan ke tenggorokan atau kloaka burung, memutar tiga kali, masukkan ke dalam tabung centrifuge, potong bagian yang terbuka, tutup rapat, dan beri label. Sampel yang dapat segera diuji harus disimpan pada suhu 2-8°C 24 jam, dan sampel yang tidak dapat segera diuji harus disimpan pada suhu -20°C.

– Seluruh darah: Gunakan EDTA sebagai antikoagulan, hindari antikoagulan heparin, gunakan darah segar utuh, atau simpan pada suhu 2-8°C tidak lebih dari 7 hari, atau simpan pada suhu -20°C tidak lebih dari 3 bulan, menghindari siklus pembekuan-pencairan yang berulang.

– Jaringan: Ambil otot segar atau jaringan organ tidak melebihi 100mg, gunakan 200-500μL air steril untuk menyiapkan homogenat jaringan, dan melanjutkan dengan persiapan sampel selanjutnya.

1.2 Persiapan Sampel:

Menurut “GB 4789.4-2016 Standar Keamanan Pangan Nasional – Pemeriksaan Mikrobiologi Pangan – Tes Salmonella” bagian 5.1 atau standar lain yang berlaku, memproses sampel dengan pra-pengayaan, dan siapkan suspensi bakteri untuk digunakan nanti. Timbang 25g (ml) sampel dan tempatkan dalam cangkir homogenisasi steril yang berisi 225mL Buffered Peptone Water (BPW). Homogenkan pada 8000rpm/menit hingga 10000rpm/menit selama 1 menit hingga 2 menit atau masukkan ke dalam kantong homogenisasi steril yang berisi 225mL BPW dan homogenkan dengan bellyer selama 1 menit hingga 2 menit. Jika sampelnya cair, homogenisasi tidak diperlukan; kocok dengan baik. Jika pengukuran pH diperlukan, sesuaikan pH menjadi 6,8±0,2 menggunakan 1mol/mL NaOH atau HCl steril.Lakukan operasi aseptik untuk memindahkan sampel ke dalam labu berbentuk kerucut 500mL. Jika menggunakan tas homogenisasi, budidaya langsung dapat dilakukan. Inkubasi pada suhu 36°C±1°C selama 8 jam hingga 18 jam. Jika sampel merupakan produk beku, cairkan pada suhu di bawah 45°C selama tidak lebih dari 15 menit atau pada suhu 2°C hingga 5°C selama tidak lebih dari 18 jam. Lihat Sanshi Biological “Total DNA/RNA Extraction Kit petunjuk” (Katalog: DP201) atau perangkat/metode ekstraksi asam nukleat lainnya yang memenuhi persyaratan relevan untuk ekstraksi asam nukleat dari sampel yang diproses. Tempatkan sampel asam nukleat yang telah diekstraksi ke dalam lemari es dan lakukan deteksi sesegera mungkin. Simpan pada suhu 4°C tidak lebih dari 7 hari atau pada suhu -20°C tidak lebih dari 6 bulan.

2. Persiapan Sistem Reaksi (Daerah Reaksi)

2.1 Keluarkan setiap komponen kit, benar-benar mencair pada suhu kamar, mesin sentrifugal untuk 10 detik, dan sentrifugasi cairan di dalam dinding tabung dan tutup tabung ke dasar tabung. Siapkan larutan reaksi sesuai dengan jumlah sampel (n+2, dimana n adalah jumlah sampel, disarankan untuk mengaturnya 1 kontrol positif dan 1 kontrol negatif untuk setiap percobaan). Metode persiapan khusus: Mengambil (n+2) tabung reaksi yang berisi larutan Sal premix, tambahkan 11,5µL larutan reaksi PiHV ke setiap tabung, gunakan pipet agar tercampur rata, 23μL per sumur, dan simpan di tempat yang lebih dingin.

2.2 Kemudian secara berurutan tambahkan 2μL kontrol negatif, sampel asam nukleat yang diekstraksi, dan Sal kontrol positif terhadap larutan reaksi. Tutup tutup tabung, membuat rekor, dan volume total setiap reaksi adalah 25μL. Aduk rata, mesin sentrifugal untuk 10 detik, dan melakukan percobaan amplifikasi pada instrumen PCR.

3. Amplifikasi PCR (Area Amplifikasi dan Analisis Produk)

Pra-denaturasi pada suhu 95°C untuk 2 menit; Denaturasi pada suhu 95°C untuk 10 detik, anil dan ekstensi pada suhu 60°C untuk 35 detik, 40 siklus. Kumpulkan sinyal fluoresensi pada 60°C. Pilih saluran fluoresensi FAM (menggunakan instrumen PCR kuantitatif fluoresensi waktu nyata seperti seri ABI, jika diperlukan, hubungi produsennya atau tambahkan pewarna koreksi ROX; jika tidak, mengikuti prosedur normal).

4. Interpretasi Hasil

4.1 Ketentuan Validitas Eksperimen:

Kontrol positif: Nilai Ct di saluran FAM < 28 dan penampilan seorang “S”-kurva amplifikasi berbentuk. Kontrol negatif: Tidak ada nilai Ct atau nilai Ct ≥ 40 dan tidak “S”-kurva amplifikasi berbentuk. Hasil percobaan valid dalam kondisi ini; jika tidak, ulangi percobaannya. Jika pengujian berulang masih tidak valid, silakan hubungi personel teknis pabrikan.

4.2 Interpretasi Hasil Sampel:

Nilai Ct ≤ 35 dengan sebuah “S”-kurva amplifikasi yang berbentuk dianggap positif untuk asam nukleat Salmonella. Nilai Ct antara 35 Dan 40 dianggap mencurigakan, dan pengujian ulang dianjurkan. Hal ini mungkin disebabkan oleh ekstraksi asam nukleat di bawah standar atau adanya zat penghambat yang kuat (seperti sisa disinfektan, antikoagulan, dll.). Disarankan untuk memproses ulang sampel untuk ekstraksi dan amplifikasi asam nukleat. Pertama, mengecualikan “positif palsu” hasil yang disebabkan oleh kontaminasi aerosol, lalu ekstrak kembali dan uji asam nukleatnya. Jika, setelah mengecualikan kontaminasi aerosol, tes ulang saluran FAM menunjukkan nilai Ct < 35 dengan kurva amplifikasi yang jelas, itu dianggap positif; jika tidak, itu dianggap negatif.

Tidak ada nilai Ct atau nilai Ct ≥ 40 dan tidak “S”-kurva amplifikasi yang berbentuk dianggap negatif untuk asam nukleat Salmonella.

Tindakan pencegahan：

• Untuk mencegah kontaminasi, percobaan harus dipartisi secara ketat, dan isolasi fisik antar partisi diutamakan untuk menghindari kontaminasi silang akibat faktor manusia. Kenakan jas lab dan sarung tangan lateks selama percobaan, menggunakan alat secara mandiri di berbagai bidang, mengganti sarung tangan dan jas lab bila diperlukan. Setelah PCR, jangan langsung membuka tutupnya; buka setelah pendinginan yang cukup untuk meminimalkan kontaminasi aerosol.
• Cairkan reagen sepenuhnya sebelum digunakan, tetapi hindari siklus pembekuan-pencairan yang berulang. Tabung reaksi PCR yang disediakan dalam kit berukuran 0,2mL; jika penggantian diperlukan, transfer setelah pencairan lengkap. Ikuti dengan ketat petunjuk untuk persiapan reagen dan penambahan sampel. Stasiun Kerja, sentrifugal, pipet, dan instrumen lainnya harus didesinfeksi secara teratur dengan disinfektan yang mengandung klorin, alkohol, agen dekontaminasi asam nukleat, atau sinar UV.
• Hasil negatif belum tentu berarti inangnya tidak terinfeksi virus. Kualitas sampel buruk, beban virus yang rendah, atau adanya zat penghambat yang kuat (seperti alkohol, desinfektan, antikoagulan, dll.) dapat menyebabkan kegagalan ekstraksi asam nukleat (deteksi) dan sebuah “negatif” hasil. Ikuti kriteria interpretasi hasil, dan ketika ada hasil yang mencurigakan, pertama-tama singkirkan kontaminasi aerosol. Jika ada pertanyaan lain, hubungi personel teknis pabrikan.
• Produk ini hanya untuk sekali pakai. Komponen dalam reagen sensitif terhadap cahaya alami; hindari paparan cahaya selama pengemasan dan penyimpanan. Setelah pengemasan, jangan berulang kali dibekukan-dicairkan. Untuk penggunaan penelitian ilmiah saja; bukan untuk diagnosis klinis atau tujuan lain.