Solarbio Malondialdehid (MDA) Kit Pengujian Konten

Malondialdehida (MDA) Kit Pengujian Konten

Catatan: Hal ini perlu untuk diprediksi 2-3 perbedaan sampel yang besar sebelum penentuan formal. Peralatan Operasi: Spektrofotometer.

Kucing No: SM0020

Ukuran: 50T/48S

Komponen:

Catatan: Solusi yang berfungsi untuk deteksi MDA sulit untuk dihilangkan, yang dapat dipanaskan pada suhu 70℃ dan digetarkan dengan keras untuk mendorong pembubaran. Atau dengan perawatan ultrasonik untuk meningkatkan pembubaran.

Deskripsi Produk:

• Lipid peroksida dihasilkan melalui interaksi radikal bebas oksigen dengan asam lemak tak jenuh, akhirnya membentuk senyawa seperti malondialdehid (MDA). Tingkat peroksidasi lipid berfungsi sebagai indikator, yang dapat dinilai dengan mengukur kadar MDA.
• Dalam kondisi asam dan suhu tinggi, senyawa berwarna coklat-merah, 3,5,5-tiga metil sulfametoksazol-2,4-dua keton, disintesis melalui reaksi kondensasi antara MDA dan asam tiobarbiturat (TBA). Senyawa ini menunjukkan serapan maksimum pada 532 nm. Penilaian peroksidasi lipid melibatkan analisis kolorimetri. Namun, adanya gula larut dapat mengganggu proses pendeteksian. Reaksi gula larut dengan TBA menghasilkan reaksi warna dengan panjang gelombang serapan sebesar 450 nm dan 532 nm. Dalam kit pengujian ini, kandungan MDA ditentukan oleh varians serapan pada 532 nm, 450 nm, Dan 600 nm.
• Karena adanya sukrosa pada jaringan tumbuhan dan glukosa pada jaringan hewan, kit ini mencakup dua formula komputasi yang disesuaikan untuk sukrosa dan glukosa. Formula ini cocok untuk penilaian lipid.

Reagen dan Peralatan Diperlukan tetapi Tidak Disediakan:

Spektrofotometer, mandi air, mesin sentrifugal meja, pipet transfer,1 mL kuvet kaca, mortir/homogenizer, es dan air suling.

Prosedur:

SAYA. Persiapan sampel:

Bakteri atau sel:

Kumpulkan bakteri atau sel ke dalam tabung centrifuge. 5 juta bakteri atau sel dapat bercampur dengannya 1 mL reagen Ekstraksi. Gunakan ultrasonikasi untuk membelah bakteri dan sel (ditempatkan di atas es, daya ultrasonik 200W, waktu ultrasonik 3 detik, selang 10 detik, ulangi untuk 30 waktu). Sentrifugasi di 8000 ×g untuk 10 menit pada suhu 4℃ untuk menghilangkan bahan yang tidak larut, dan mengambil supernatan di atas es sebelum pengujian.

Jaringan:

0.1 g tisu dapat dicampur 1 mL reagen Ekstraksi dan dihomogenisasi sepenuhnya dalam penangas es. Kemudian sentrifugasi pada 8000 ×g untuk 10 menit pada suhu 4℃ untuk menghilangkan bahan yang tidak larut, dan mengambil supernatan di atas es sebelum pengujian.

Serum:

Deteksi

II. Tekad prosedur:

1. Panaskan spektrofotometer lebih dari 30 menit, atur nol dengan sulingan
2. Tambahkan reagen dengan daftar berikut:

Campuran akan diinkubasi pada suhu 100℃ selama 60 menit (tutup rapat untuk mencegah hilangnya kelembapan), didinginkan di atas es, dan disentrifugasi pada 10000 ×g untuk 10 menit pada suhu kamar untuk menghilangkan bahan yang tidak larut. Masukkan supernatan 1 mL kuvet kaca, dan ukur serapannya pada 450 nm, 532 nm dan 600 nm.

∆A450=A450(T)-A450(B), ∆A532=A532(T)-A532(B), ∆A600 =A600(T)-A600(B). Tabung kosong perlu diuji sekali atau dua kali.

AKU AKU AKU. Perhitungan:

1. Jaringan, bakteri atau sel yang dikultur

• Konsentrasi protein:

MDA (nmol/mg prot)=(6.45×(∆A532-∆A600)-1.29×∆A450)×Vrv ™(Cpr×Vs)

=5×(6.45×(∆A532-∆A600)-1.29×∆A450)−Cpr

• Berat sampel:

MDA (nmol/g berat)=( 6.45×(∆A532-∆A600)- 1.29×∆A450)×Vrv ™(W×Vs^Vsv)

=5×(6.45×(∆A532-∆A600)- 1.29×∆A450)−W

• jumlah sel:

MDA (nmol/104sel)=( 6.45 ×(∆A532-∆A600)- 1.29×A∆450)×Vrv ™(400×Vs^Vsv)

=0,01×(6.45×(∆A532-∆A600)- 1.29×∆A450)

• Serum:

MDA (nmol/mL)=(6.45×(ΔA532 - ΔA600)-1.29×ΔA450)×Vrv^Vs

=5×(6.45×(ΔA532 - ΔA600)-1.29×ΔA450)

2. Jaringan tumbuhan:

• Berat sampel

MDA (nmol/g berat)= (6.45×(∆A532-∆A600)-0.56×∆A450)×Vrv ™(W×Vs^Vsv)

=5×(6.45 ×(∆A532-∆A600)- 0.56×∆A450)−W

• Konsentrasi protein:

MDA (nmol/mg prot)=( 6.45 ×(∆A532-∆A600)- 0.56×∆A450)×Vrv ™(Cpr×Vs)

=5×(6.45 ×(∆A532-∆A600)- 0.56×∆A450)−Cpr

Tali: Volume reaksi total, 1 ml; Vs: Volume sampel, 0.2 ml;

Vsv: Volume ekstraksi, 1 ml;

Cpr: Konsentrasi protein sampel, mg/mL; W: Berat sampel, G;

400: Jumlah total bakteri dan sel, 5 juta.

Catatan:

Jika ditemukan nilai serapan sampel terlalu rendah, waktu penangas air perebusan bisa diatur 60 menit sampai 90 menit atau lebih lama. Pendeteksian MDA pada percobaan yang sama perlu diperpanjang pada waktu yang sama untuk menghindari kesalahan.

Referensi

• Spitz DR, Oberley L W. Uji aktivitas superoksida dismutase pada homogenat jaringan mamalia[J]. Biokimia Analitik,1989
• Masayasu M, Hiroshi Y. Metode pengujian aktivitas superoksida dismutase yang disederhanakan untuk penggunaan klinis[J]. Klinik Kimia

Produk-produk terkait:

BC3590/BC3595 Hidrogen Peroksida (H2O2) Kit Pengujian Konten

BC1090/BC1095 Xantin Oksidase (XOD) Kit Uji Aktivitas

BC0690/BC0695 Glukosa Oksidase (TUHAN) Kit Uji Aktivitas BC1270/BC1275 Kit Uji Kandungan Karbonil Protein BC1280/BC1285 Diamina Oksidase (DAO) Kit Uji Aktivitas BC1290/BC1295 Kit Uji Kandungan Anion Superoksida

Pelanggan’ Ulasan Produk Solarbio untuk Referensi