SENO Sperm Sample DNA Extraction Kit

1. Komponen kit reagen

2. Penyimpanan

Kit reagen ini harus disimpan pada suhu kamar (15-25℃) dan dalam kondisi kering, dengan umur simpan 12 bulan. Kolom pemurnian ekstraksi DNA dapat disimpan 1 tahun di lingkungan sejuk dan kering. Proteinase K dan RNase A mengandung bahan pengawet, memungkinkan transportasi pada suhu kamar, tapi untuk penyimpanan jangka panjang, mereka harus disimpan pada -20℃.

3. Petunjuk Penggunaan Kit Reagen

3.1 Kit reagen ini ditujukan untuk penelitian biologi molekuler dan tidak boleh digunakan untuk diagnosis atau pengobatan penyakit.

3.2 Beberapa komponen dalam kit reagen mengandung bahan iritan. Tindakan perlindungan seperti mengenakan pakaian pelindung dan kacamata direkomendasikan.

3.3 Selama penggunaan kit reagen ini, mesin sentrifugal berkecepatan tinggi, mandi air (mandi logam), pencampur pusaran, etanol anhidrat, air deionisasi steril, dan tabung EP perlu disiapkan oleh pengguna.

4. Pengantar Kit Reagen

The sperm sample genomic DNA extraction kit provides a rapid and efficient purification solution for sperm sample DNA. It achieves sample pemurnian DNA effectively through a dedicated extraction buffer system combined with specific nucleic acid purification columns.

This kit can extract sperm sample DNA within 30 menit, and the entire purification process does not require toxic reagents such as phenol-chloroform. DNA yang diekstraksi dapat langsung digunakan untuk PCR, Blot Selatan, dan aplikasi lainnya.

5. Prinsip dan Prosedur Eksperimental

6. Proses Ekstraksi

Sebelum Memulai Eksperimen:

A.Reagent Buffer SP:This buffer should be stored long-term in an environment between 2℃ and 8℃

B.Buffer Reagen C may precipitate under low-temperature conditions. Disarankan untuk memanaskan pada suhu 65℃ untuk 5 menit. After the precipitate dissolves, it can be used normally.

C.Cuci Buffer 1: Sebelum digunakan, tambahkan etanol anhidrat dalam jumlah tertentu seperti yang ditunjukkan pada label botol reagen. Mark a check on the label to indicate the addition of anhydrous ethanol.

D. Buffer Elusi adalah a 0.1x solusi TE mengandung sedikit EDTA. If EDTA has an impact on subsequent experiments, it is recommended to use sterile deionized water as a substitute for the elution buffer.

1. Pemrosesan Sampel:

Pipet 200μl of frozen sperm, incubate at 75℃ for 10 minutes until the sperm sample is not viscous. Sentrifugasi di 12000 rpm untuk 5 menit, aspirate the supernatant as much as possible, and the sperm cells will sediment at the bottom of the tube.

2. Add to the sediment from the previous step: 400μl Reagent Buffer SP, 20μl Proteinase K (10 mg/ml), 20μl RNAseA (10 mg/ml).Digest at 65℃ for 10 menit, balikkan dan campur 6-7 times during digestion until the sample is fully digested.
3. Tambahkan volume yang sama Buffer Reagen C and an equal volume of anhydrous ethanol, and mix well by pipetting.

(Misalnya: If you add 400μl of Reagent Buffer IV, you will need to add approximately 460μl of Reagent Buffer C and 460μl of anhydrous ethanol. A small amount of precipitation may form after adding Reagent Buffer C, but it does not affect subsequent experiments.)

4. Transfer the obtained liquid to a DNA extraction purification column (cassette) (sekitar 650-700μl setiap kali). Let it stand at room temperature for 2 menit, centrifuge at over 8,000 rpm untuk 1 menit, discard the collected waste liquid, dan masukkan kembali tabung pengumpul ke dalam kolom pemurnian untuk langkah selanjutnya.
5. Ulangi langkah 4, adding the remaining liquid to the DNA extraction purification column (cassette), centrifuge at over 8,000 rpm untuk 1 menit, discard the waste liquid and the collection tube.
6. Tempatkan kolom pemurnian ekstraksi DNA (cassette) ke dalam tabung koleksi, menambahkan 300 μl Buffer Cuci 1, centrifuge at over 8,000 rpm untuk 1 menit, discard the waste liquid, dan letakkan kolom pemurnian ekstraksi DNA (cassette) kembali ke dalam tabung untuk langkah berikutnya.

(Catatan: Confirm that anhydrous ethanol has been added to Wash Buffer 1.)

7. Menambahkan 500μl Buffer Cuci 1 ke kolom pemurnian ekstraksi DNA (cassette), sentrifugasi di 14,000 rpm (20,000×g) untuk 2 menit, extend the centrifugation time appropriately to dry the membrane more thoroughly.
8. Tempatkan kolom pemurnian ekstraksi DNA (cassette) ke dalam tabung centrifuge yang baru, open the lid, incubate at 65℃for 2 menit. Extend this step if necessary to evaporate ethanol as much as possible, preventing ethanol residue from affecting downstream experiments.
9. Drop-suspend 50-100μl Buffer Elusi ke membran, sentrifugasi di 12,000 rpm untuk 2 menit.

(Catatan: 1. Using 50μl of Elution Buffer to elute DNA can increase DNA concentration but decreases the overall DNA yield. 2. The eluted DNA can be reapplied to the DNA extraction purification column, centrifuged at 12,000 rpm untuk 2 minutes again, to increase DNA yield.)