1. Componenti del kit di reagenti
| Specifiche | 50T | 100T |
| Gatto. NO. | SN0233 | SN0234 |
| Colonne di estrazione del DNA (impostato) | 50 (impostato) | 100 (impostato) |
| Tampone reagente B | 20 ml | 2×20 ml |
| Tampone reagente C | 30 ml | 2×30 ml |
| Tampone di lavaggio 1 | 15 ml | 2 × 15 ml |
| Tampone di eluizione | 20 ml | 20 ml |
| Proteinasi K | 1ml | 1ml |
| RNasi A | 1ml | 1ml |
| Manuale di istruzioni | 1 | 1 |
2. Magazzinaggio
Questo kit di reagenti deve essere conservato a temperatura ambiente (15-25℃) e in condizioni asciutte, con una durata di conservazione di 12 mesi. Le colonne di purificazione per l'estrazione del DNA possono essere conservate per 1 anno in un ambiente fresco e asciutto. Proteinasi K e RNasi A contengono conservanti, consentendo il trasporto a temperatura ambiente, ma per la conservazione a lungo termine, dovrebbero essere mantenuti a -20 ℃.
3. Istruzioni per l'uso del kit di reagenti
3.1 Questo kit di reagenti è destinato alla ricerca di biologia molecolare e non deve essere utilizzato per la diagnosi o il trattamento di malattie.
3.2 Alcuni componenti del kit di reagenti contengono sostanze irritanti. Si raccomandano misure protettive come indossare indumenti protettivi e occhiali protettivi.
3.3 Durante l'utilizzo di questo kit di reagenti, una centrifuga ad alta velocità, bagnomaria (bagno di metallo), miscelatore a vortice, etanolo anidro, acqua deionizzata sterile, e le provette EP devono essere preparate dall'utente.
4. Introduzione al kit di reagenti
The Oral Swab Purificazione del DNA Kit provides a rapid and efficient method for purifying DNA from oral swabs, widely used for the extraction of epithelial cells such as oral epithelium.
The Oral Swab DNA Rapid Purification Kit can extract total DNA from oral epithelial cells within 30 minuti. The entire purification process does not require toxic reagents such as phenol-chloroform. Il DNA estratto può essere utilizzato direttamente per PCR, Southernblotting, e altre applicazioni.
5. Principi e procedure sperimentali
6. Processo di estrazione
Prima di iniziare l'esperimento:
UN. Reagent Buffer B and C può precipitare in condizioni di bassa temperatura. We recommend heating at 65℃for 5 minuti. Dopo che il precipitato si è sciolto, può essere utilizzato normalmente.
B. Prima dell'uso, add the specified amount of anhydrous ethanol to Tampone di lavaggio 1as indicated on the bottle label. Contrassegnare un segno di spunta sull'etichetta per indicare l'aggiunta di etanolo anidro.
C. Il tampone di eluizione è un0.1x soluzione TEcontaining minimal amounts of EDTA. Se l'EDTA potrebbe influenzare gli esperimenti successivi, it is advisable to substitute Elution Buffer with sterile deionized water.
- Gestione dei campioni:
- Sampling: Take a sterilized cotton swab, insert it into the mouth, rub against the inner cheek back and forth for more than 20 volte.
- Use scissors to cut the head of the cotton swab, place it into a 2 ml centrifuge tube, and add 400μl of Reagente Buffer B.
- Aggiungere10µl di proteinasi K (10 mg/ml) and 10μl RNase A (10 mg/ml), invert thoroughly, incubate at 65°C for 20 minuti, vortex for 10 seconds during incubation.
- Aggiungere 400μl of Reagente Buffer Cal lisato, vortex thoroughly.
- Aggiungere 200μl of pre-chilled absolute ethanol, mescolare bene; precipitation may occur, but it will not affect subsequent experiments.
- Transfer the obtained liquid into a DNA extraction and purification column (kit) (circa 650~700μl ogni volta), centrifugare a >8,000 giri al minuto per 1 minuto, smaltire il liquido di scarto raccolto, and reinsert the collection tube into the DNA extraction and purification column (kit) per il passo successivo.
- Place the DNA extraction and purification column (kit) into a collection tube, aggiungere 300ml di tampone di lavaggio 1, centrifugare a >8,000 giri al minuto per 1 minuto, eliminare il liquido di scarto, and reinsert the DNA extraction and purification column (kit) into the tube for the next step.
(Nota: Ensure that absolute ethanol has been added to Wash Buffer 1.)
- Aggiungere 500ml di tampone di lavaggio 1to the DNA extraction and purification column (kit), centrifugare a 14,000 giri/min (20,000× g) per 2 minuti, extend the centrifugation time appropriately to dry the membrane further.
- Place the DNA extraction and purification column (kit) in una nuova provetta da centrifuga, aprire il coperchio, incubate at 65°C for 2 minuti; this step can be extended appropriately to evaporate ethanol as much as possible, preventing residual ethanol from affecting downstream experiments.
- Elute 100μl di tampone di eluizionesulla membrana, centrifugare a 12,000 giri al minuto per 2 minuti.
(Nota: 1. Eluting DNA with 50μl of Elution Buffer can increase DNA concentration but decrease total DNA yield; 2. Eluted DNA in the eluate can be reapplied to the DNA extraction and purification column, centrifuge again at 12,000 giri al minuto per 2 minutes to increase DNA yield.)
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