1. Componenti del kit di reagenti
| Specifiche | 50T | 100T |
| Gatto. NO. | SN0251 | SN0252 |
| Colonne di estrazione del DNA (impostato) | 50 (impostato) | 100 (impostato) |
| Reagent Buffer IV | 20 ml | 2 × 20 ml |
| Tampone reagente C | 30 ml | 2 × 30 ml |
| Reagent Buffer FF | 60 ml | 2 ×60 ml |
| Tampone di lavaggio 1 | 15 ml | 2 × 15 ml |
| Tampone di eluizione | 20 ml | 20 ml |
| Proteinasi K | 1ml | 2x1 ml |
| RNasiA | 1ml | 2x1 ml |
| Manuale di istruzioni | 1 | 1 |
2. Magazzinaggio
Questo kit di reagenti deve essere conservato a temperatura ambiente (15-25℃) e in condizioni asciutte, con una durata di conservazione di 12 mesi. Le colonne di purificazione per l'estrazione del DNA possono essere conservate per 1 anno in un ambiente fresco e asciutto. Proteinasi K e RNasi A contengono conservanti, consentendo il trasporto a temperatura ambiente, ma per la conservazione a lungo termine, dovrebbero essere mantenuti a -20 ℃.
3. Istruzioni per l'uso del kit di reagenti
3.1 Questo kit di reagenti è destinato alla ricerca di biologia molecolare e non deve essere utilizzato per la diagnosi o il trattamento di malattie.
3.2 Alcuni componenti del kit di reagenti contengono sostanze irritanti. Si raccomandano misure protettive come indossare indumenti protettivi e occhiali protettivi.
3.3 Durante l'utilizzo di questo kit di reagenti, una centrifuga ad alta velocità, bagnomaria (bagno di metallo), miscelatore a vortice, etanolo anidro, acqua deionizzata sterile, e le provette EP devono essere preparate dall'utente.
4. Introduzione al kit di reagenti
Paraffin-embedded tissue DNA purification kit provides a rapid and effective DNA purification solution for samples in paraffin sections. Tissues are collected after paraffin dissolution using a dedicated dewaxing solution, and sample DNA is obtained through subsequent extraction processes.
This kit can extract sample DNA from paraffin sections within 30 minuti, e l'intero processo di purificazione non richiede reagenti tossici come il fenolo-cloroformio. Il DNA estratto può essere utilizzato direttamente per PCR, Southernblotting, e altre applicazioni.
5. Principi e procedure sperimentali
6. Processo di estrazione
Prima di iniziare l'esperimento:
UN. Reagent Buffer FF:This buffer should be stored long-term in an environment between 2°C and 8°C.
B. Reagent Buffers IV and C può precipitare in condizioni di bassa temperatura. It is recommended to heat at 65°C for 5 minuti. Dopo che il precipitato si è sciolto, the solution can be used normally.
C. WashRespingente 1 should have a specified amount of anhydrous ethanol added before use, as indicated on the reagent bottle label. Check the label with a tick mark to indicate the addition of anhydrous ethanol.
D. Il tampone di eluizione è un 0.1x soluzione TE with a minimal amount of EDTA. If EDTA affects subsequent experiments, it is advisable to replace the elution buffer with sterile deionized water.
- Elaborazione del campione:
Select 5-10 paraffin sections (1mm-3mm thickness), use scissors to remove excess wax, and cut the embedded tissue sample into small pieces. Place them in a 1.5ml centrifuge tube, aggiungere 800μl Reagent Buffer FF, incubate at 75°C for 5 minutes until all paraffin is dissolved. Centrifuge at 12000rpm for 5 minuti, scartare il surnatante.
- Aggiungere 400μl Reagent Buffer IV, 20µl di proteinasi K (10 mg/ml), and 10μl RNaseA (10 mg/ml) to the precipitate from the previous step. Digest at 65°C, stirring every 6-7 volte fino al completamento della digestione.
- Aggiungere un volume uguale di Tampone reagente CE an equal volume of anhydrous ethanol, mix thoroughly by pipetting.
(Per esempio: If you add 400μl Reagent Buffer IV, approximately add 430μl Reagent Buffer C and 430μl anhydrous ethanol. Some precipitation may occur after adding Reagent Buffer C, ma non influisce sugli esperimenti successivi.)
- Add the obtained liquid to the DNA extraction purification column (or cartridge) (circa 650-700μl ogni volta), let it stand at room temperature for 2 minuti, centrifuge at over 8,000rpm for 1 minuto. Discard the collected waste and reinsert the collection tube into the purification column for the next step.
- Ripeti il passaggio 4, aggiungendo il liquido rimanente alla colonna di purificazione dell'estrazione del DNA (or cartridge), centrifuge at over 8,000rpm for 1 minuto, discard the waste and the collection tube.
- Posizionare la colonna di purificazione per l'estrazione del DNA (or cartridge) nel tubo di raccolta, aggiungere 300ml WashRespingente 1, centrifuge at over 8,000rpm for 1 minuto. Discard the waste and reinsert the purification column into the tube for the next step.
(Nota: Confirm that anhydrous ethanol has been added to Wash Respingente 1.)
- Aggiungere 500ml WashRespingente 1 alla colonna di purificazione per l'estrazione del DNA (or cartridge), centrifuge at 14,000rpm (20000× g) per 2 minuti. Extend centrifugation time if needed for a dryer membrane.
- Posizionare la colonna di purificazione per l'estrazione del DNA (or cartridge) in a new centrifuge tube, aprire il coperchio, incubate at 65°C for 2 minuti. Extend this step if necessary to evaporate ethanol to prevent residual ethanol from affecting downstream experiments.
- Suspend the addition of 50-100μl Elution Buffer to the membrane, centrifuge at 12,000rpm for 2 minuti.
(Nota: 1. Using 50μl Elution Buffer for DNA elution can increase DNA concentration but decreases total DNA yield. 2. Il DNA eluito può essere riapplicato alla colonna di purificazione per l'estrazione del DNA, centrifuged at 12000rpm for 2 minutes again to increase DNA yield.)
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