Kit per il dosaggio delle proteine ​​BCA Solarbio

La BCA (Acido bicinconinico) Il kit di analisi delle proteine ​​è un metodo ampiamente utilizzato per la quantificazione delle concentrazioni di proteine ​​in un campione. Questo test si basa sulla rilevazione colorimetrica del rame(II) ioni ridotti dalle proteine ​​in condizioni alcaline. L'intensità del colore viola risultante è proporzionale alla concentrazione proteica, consentendo una quantificazione precisa.

Ecco una guida generale su come utilizzare a Proteina BCA Kit di analisi:

Materiali richiesti:

1. Kit per il dosaggio delle proteine ​​BCA
2. Campioni di proteine (soluzioni standard o campioni sconosciuti)
3. Micropiastra o cuvette
4. Micropipette e puntali
5. Lettore di micropiastre o spettrofotometro
6. Acqua distillata

Procedura:

1. Preparazione degli standard proteici:
   • Preparare una serie di standard proteici con concentrazioni note. Questi standard verranno utilizzati per creare una curva standard per la quantificazione.
2. Preparazione dei campioni:
   • Diluire i campioni di proteine ​​a una concentrazione compresa nell'intervallo degli standard. È importante disporre di campioni entro l'intervallo lineare del test per una quantificazione accurata.
3. Preparazione del reagente di lavoro BCA:
   • Miscelare il reagente BCA A (Soluzione di acido bicinconinico) e il reagente BCA B (Rame(II) soluzione di solfato) in un 50:1 rapporto. Garantire una miscelazione accurata.
4. Incubazione:
   • Aggiungi il reagente di lavoro BCA ai tuoi standard e campioni, e quindi incubare la miscela di reazione ad una temperatura adeguata (comunemente 37°C) per 30 minuti. Durante questo periodo, le proteine ​​nei campioni ridurranno gli ioni rame, formando un complesso di colore viola.
5. Misurazione:
   • Dopo l'incubazione, misurare l'assorbanza di ciascun pozzetto ad una lunghezza d'onda intorno 562 nm utilizzando un lettore di micropiastre o uno spettrofotometro. L'assorbanza è direttamente proporzionale alla concentrazione proteica.
6. Creazione della curva standard:
   • Tracciare i valori di assorbanza degli standard rispetto alle loro concentrazioni note per creare una curva standard. Questa curva verrà utilizzata per determinare le concentrazioni proteiche di campioni sconosciuti.
7. Quantificazione di campioni sconosciuti:
   • Misura l'assorbanza dei tuoi campioni sconosciuti e utilizza la curva standard per determinare le loro concentrazioni proteiche.
8. Analisi dei dati:
   • Calcolare le concentrazioni proteiche in base alla curva standard. La maggior parte dei lettori di micropiastre dispone di un software in grado di automatizzare questo processo.
9. Risultati:
   • Riporta le concentrazioni proteiche dei tuoi campioni nelle unità appropriate (per esempio., mg/ml) sulla base del dosaggio BCA.

È importante seguire le istruzioni specifiche fornite dal produttore del kit di analisi delle proteine ​​BCA, poiché il protocollo esatto può variare tra i kit. Inoltre, assicurarsi che tutti i reagenti siano conservati correttamente, e il test viene eseguito nelle condizioni consigliate per risultati accurati e affidabili.

Il kit per il dosaggio delle proteine ​​BCA si basa sulla proteina che riduce Cu2+ in Cu+ e sul principio secondo cui il BCA forma un complesso viola-blu con Cu1+ in condizioni alcaline, seguito dal rilevamento dell'assorbanza a 562 nm e dal confronto con la curva standard per quantificare la proteina.