Solarbio Coomassie (Bradford) Kit per il dosaggio delle proteine ​​50T

Gatto n.: PC0015

Misurare: 50T

Magazzinaggio: Conservazione del sigillo dopo l'apertura, questo kit dalla data dell'ordine ha validità di nove mesi.

Descrizione

Il colorante Coomassie G-250 è un reagente colorimetrico utilizzato per il rilevamento e la quantificazione delle proteine ​​totali. In un mezzo acido il colorante Coomassie si lega alle proteine ​​provocando un immediato spostamento del massimo di assorbimento da 465 nm a 595 nm con un concomitante cambiamento di colore dal verde al blu. In un certo intervallo di concentrazione, il valore di assorbanza A595 misurato è direttamente proporzionale alla concentrazione proteica.

Protocollo

• MicropiastraLettore
  1. Sciogliere completamente lo standard BSA, diluire da 10ul a 250ul, la concentrazione finale di 0,2 mg/ml. Il tampone di diluizione dipendeva dal campione proteico misurato. Per semplicità, suggerito di utilizzare NaCl allo 0,9% o PBS.
  2. 5×G250mescolare bene prima di 1ml 5×G250 diluito con 4ml ddH2O. 1La soluzione ×G250 può far risparmiare una settimana a 4 ℃.
  3. La norma secondo 0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, e 20ul rispettivamente aggiunti a piastre da 96 pozzetti, e diluizione PBS per completare.
  4. Diluire il campione(preparare alcuni gradienti, ad esempio 2 volte, 4 volte, 8 volte diluizione), e aggiungere 20ul di campione 96 BENE. Per evitare errori, i punti campione devono essere impostati dopo la linea standard di 1/2.
  5. Aggiungere 200 ul diluiti 1×G250 in ciascun pozzetto, temperatura ambiente per 3-5 min.
  6. Determinazione dell'assorbanza.
  7. Secondo la curva standard calcolare la proteina campione

• UV-VisSpettrofotometro

1. 8*10provetta da centrifuga da ml(o più) ed etichettato con 1~8.
2. Diluire 100 ul di BSA con 2,4 ml di PBS a 2 mg/ml.
3. 5×G250 mescolare bene prima dell'uso. 1ml 5×G250 diluito con 4 ml ddH2O. 1La soluzione ×G250 può far risparmiare una settimana a 4 ℃.
4. Aggiungere i reagenti secondo la tabella seguente (ogni pozzetto 5ml, l'extra viene utilizzato per pulire la cuvetta)

5. Misurare il valore OD dopo 3 minuti di reazione. Per garantire l'accuratezza dell'esperimento, misurare il valore OD ogni 2 minuti

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