Solarbio lacato deidrogenasi (LDH) Kit di analisi dell'attività

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Descrizione

Codice articolo: BC0685

Specifica: 100 Test/48 strisce

introduzione

  • La lattato deidrogenasi (LDH) Il kit di analisi dell'attività quantifica l'attività degli enzimi LDH nei campioni biologici.
  • LDH è cruciale nella respirazione cellulare, convertendo il lattato in piruvato.
  • Livelli elevati di LDH nei tessuti o nei fluidi corporei possono indicare danni o patologie cellulari.
  • Il test viene utilizzato nei laboratori clinici e di ricerca per scopi diagnostici e sperimentali.

Contenuto

Nome del reagenteSpecificaCondizioni di archiviazione
Soluzione di estrazioneLiquido60 ml× 1 Bottiglia
Reagente unoLiquido7 ml× 1 Bottiglia
Reagente duePolvere1 Fiala
Reagente treLiquido7 ml× 1 Bottiglia
Reagente quattroLiquido25 ml× 1 Bottiglia
Soluzione standardLiquido1 ml× 1 Fiala
  • Reagente due: Prima dell'uso, aggiungere 1.3 mL di acqua distillata per scioglierlo completamente. Una volta preparato, aliquota in piccole provette e conservare a -20°C fino a 2 settimane. Evitare ripetuti cicli di congelamento-scongelamento.
  • Soluzione standard: Soluzione di piruvato di sodio con una concentrazione di 20 µmol/ml.

Componenti chiave del kit di analisi dell'attività LDH:

  1. Soluzione substrato: Contiene i componenti necessari per la reazione enzimatica, tipicamente includendo lattato e NAD^+ (nicotinammide adenina dinucleotide).
  2. Tampone di reazione: Fornisce le condizioni ottimali per la reazione enzimatica.
  3. Standard enzimatico LDH: Uno standard di riferimento con una concentrazione nota di attività LDH per la generazione di una curva standard.
  4. Reagente del dosaggio LDH: Un reagente colorimetrico o fluorimetrico che rileva il prodotto della reazione LDH, spesso portando ad un cambiamento di colore o fluorescenza.

Come utilizzare il kit di analisi dell'attività LDH:

Quella che segue è una guida generale su come utilizzare un kit di analisi dell'attività LDH. I protocolli specifici possono variare tra i kit, ed è fondamentale seguire le istruzioni fornite dal produttore del kit:

  1. Preparazione del campione: Prepara i tuoi campioni biologici (per esempio., lisati cellulari, il tessuto si omogeneizza, o fluidi corporei) e diluirli opportunamente in un tampone compatibile, se necessario.
  2. Preparazione della curva standard: Preparare una serie di standard con concentrazioni note di attività dell'enzima LDH utilizzando lo standard dell'enzima LDH fornito. Ciò si ottiene generalmente diluendo lo standard in un tampone o in una matrice del campione.
  3. Configurazione della piastra di analisi: Aggiungere i campioni e gli standard diluiti ai pozzetti di una micropiastra o di una cuvetta.
  4. Aggiunta della soluzione di substrato: Aggiungere la soluzione substrato a ciascun pozzetto o cuvetta contenente i campioni e gli standard. La reazione enzimatica convertirà il lattato in piruvato.
  5. Incubazione: Incubare la miscela di reazione per un periodo specificato, tipicamente a temperatura controllata. Si verificherà la reazione enzimatica, generando NADH (forma ridotta di NAD^+).
  6. Misurazione: Misurare l'assorbanza o la fluorescenza della miscela di reazione alla lunghezza d'onda appropriata utilizzando un lettore di micropiastre o un fluorimetro.
  7. Analisi dei dati: Utilizzare la curva standard per convertire i valori di assorbanza o fluorescenza in unità di attività dell'enzima LDH.
  8. Controllo di qualità: Controllare la precisione e l'accuratezza dei risultati assicurandosi che le prestazioni del test rientrino nell'intervallo accettabile.

Esempi sperimentali:

  1. Pesavo 0,103 g di foglie di Sedum, aggiunto 1 ml di soluzione di estrazione, omogeneizzato in un bagno di ghiaccio, centrifugato a 8000 g, 4°C per 10 minuti, e ho prelevato il surnatante per la misurazione su ghiaccio. Poi, seguendo le fasi del test, ΔA è stato calcolato come A_provetta – A_tubo di controllo = 0.275 – 0.199 = 0.076. Utilizzando l'equazione della curva standard y = 0,5218x + 0.0063 (R^2 = 0.9983), abbiamo ottenuto x = 0.134 µmol/ml. Calcolo della lattato deidrogenasi (L-LDH) attività: L-LDH (Massa U/g) = 66.67 × x ÷ W = 86.74 U/g
  2. Pesava 0,109 g di fegato di coniglio, aggiunto 1 ml di soluzione di estrazione, omogeneizzato in un bagno di ghiaccio, centrifugato a 8000 g, 4°C per 10 minuti, e ho preso il surnatante diluito 80 volte con acqua distillata e metterlo sul ghiaccio per la misurazione. Poi, seguendo le fasi del test, ΔA è stato calcolato come A_provetta – A_tubo di controllo = 0.795 – 0.132 = 0.663. Utilizzando l'equazione della curva standard y = 0,5218x + 0.0063 (R^2 = 0.9983), abbiamo ottenuto x = 1.259 µmol/ml. Calcolo della lattato deidrogenasi (L-LDH) attività: L-LDH (Massa U/g) = 66.67 × x ÷ W × fattore di diluizione = 61605.53 U/g
  3. Ho preso 10μL di siero di cavallo e ho seguito i passaggi del test. Utilizzando la piastra da 96 pozzetti, ΔA è stato calcolato come A_provetta – A_tubo di controllo = 0.415 – 0.161 = 0.254. Utilizzando l'equazione della curva standard y = 0,5218x + 0.0063 (R^2 = 0.9983), abbiamo ottenuto x = 0.475 µmol/ml. Calcolo della lattato deidrogenasi (L-LDH) attività: L-LDH (U/ml) = 66.67 × x = 31.67 U/m

Informazioni aggiuntive

Peso0.65 kg
misurare

100T/48S

marchio

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