Kit di analisi del contenuto di amido Solarbio

Kit per il dosaggio del contenuto di amido

Nota: Prendi due o tre campioni diversi per la previsione prima del test. Attrezzatura operativa: Lettore spettrofotometro/micropiastre.

Gatto n: BC0705

Misurare: 100T/96S

Componenti:

Reagente I: 110 ml×1. Conservazione a 4 ℃.

Reagente II: 110 ml×1. Conservazione a 4 ℃.

Reagente III: Polvere×2. Conservazione a 4 ℃.

Standard: Polvere×1, 10 mg di glucosio (anidro). Conservazione a 4 ℃.

Soluzione standard: Sciolto con 1 ml di acqua distillata a 10 mg/mL di soluzione standard di glucosio quando verrà utilizzata la soluzione standard. Può essere conservato per 2 settimane a 4 ℃.

Soluzione funzionante: Aggiungere 2.625 mL di acqua distillata nel Reagente III, aggiungere lentamente 14.875 mL di H2SO4 concentrato, mescolare costantemente e sciogliere completamente prima dell'uso. Può essere conservato per 1 settimana a 4 ℃.

Descrizione del prodotto:

L’amido è la principale forma di stoccaggio dello zucchero nelle piante. La determinazione del contenuto di amido ha grande importanza nella valutazione del valore nutrizionale degli alimenti e nella ricerca sul metabolismo dello zucchero nelle piante.

Separare lo zucchero solubile dall'amido 80% etanolo, quindi decomporre l'amido in glucosio mediante idrolisi acida. Il contenuto di amido può essere calcolato misurando il contenuto di glucosio utilizzando un metodo colorimetrico ad antrone.

Reagenti e attrezzature necessari ma non forniti:

Lettore spettrofotometro/micropiastre, bagnomaria, pipetta regolabile, microcuvetta in vetro/piastra a fondo piatto da 96 pozzetti, mortaio/omogeneizzatore, ghiaccio, H2SO4 concentrato e acqua distillata.

Procedura:

IO. preparazione del campione:

1. 1. Prendere 5 mg di campione, pestare nel mortaio e aggiungere 1 ml di reagente I. Dopo l'omogeneizzazione, trasferire in una provetta da centrifuga, mettere a bagnomaria a 80 ℃ per 30 minuti, poi centrifugare a temperatura ambiente e 3000 ×g per 5 minuti, scartare il surnatante, trattenere le precipitazioni.
   2. Aggiungere 0.5 ml di acqua distillata al precipitato. Mettere a bagnomaria bollente per 15 minuti (stringere il coperchio per evitare perdite d'acqua)
   3. Dopo il raffreddamento, aggiungere 1 mL di Reagente II, mettere a bagnomaria bollente per 15 minuti, agitare 3~5 volte
   4. Dopo il raffreddamento, centrifugare a temperatura ambiente e 3000 ×g per 15 minuti, prendere il surnatante per il test.

II. Determinazione procedura:

1. Preriscaldare lo spettrofotometro/lettore di micropiastre per 30 minuti, regolare la lunghezza d'onda su 620 nm, azzerare con acqua distillata.
2. Regolare il bagnomaria a 95°C.
3. Soluzione di lavoro standard: diluire il 10 mg/mL soluzione standard con acqua distillata a 0.4, 0.2, 0.1, 0.05, 0.04, 0.03, 0.02, 0.01 mg/ml.
4. Prova standard: Prendere 50 μL di soluzione standard oppure 50 µl di acqua distillata (Tubo vuoto) E 250 μL di soluzione di lavoro nella provetta EP. Mettere a bagnomaria a 95 ℃ per 10 minuti (stringere il coperchio per evitare perdite d'acqua), fresco naturale a temperatura ambiente, Prendere 200 μL in microcuvetta in vetro/piastra a fondo piatto da 96 pozzetti, determinare l'assorbanza della soluzione standard(COME) e controllo del vuoto(AB) A 620 nm. Calcolare ΔA=AS — AB. Il tubo bianco e la curva standard devono essere testati solo una o due volte.
5. Prova campione: Prendere 50 μL di campione e 250 μL di soluzione di lavoro per EP Collocare in un bagnomaria a 95 ℃ per 10 minuti (stringere il coperchio per evitare perdite d'acqua), naturalmente fresco a temperatura ambiente, Prendere 200 μL in microcuvetta in vetro/piastra a fondo piatto da 96 pozzetti, determinare l'assorbanza della provetta(A) A 620 nm. Calcola ΔAˊ= AT — AB.

III. Calcoli:

1. Crea curva standard

Prendi una soluzione standard di glucosio (0.4, 0.2, 0.1, 0.05, 0.04, 0.03, 0.02, 0.01 mg/ml) come asse x, ΔA come asse y, per disegnare la curva standard e ottenere l'equazione di regressione lineare y=kx+b, sostituendo ΔAˊ nell'equazione si ottiene x(mg/ml).

2. Calcolo del contenuto di amido Calcolato dalla massa del campione Contenuto di amido (mg/g di massa) = x×F×VE÷W÷1.11=1.351x÷W×F VE: volume dopo l'estrazione, 1.5 ml;

W: massa del campione, G;

F: rapporto di diluizione;

1.11: è la costante di conversione del contenuto di glucosio misurato con questo metodo in contenuto di amido, questo è, 111

μg di glucosio vengono colorati dal reagente antrone, che è equivalente a 100 μg di amido mediante reagente antrone.

Nota:

1. Poiché il fluido di lavoro è altamente corrosivo, si prega di operare con
2. Se il valore di assorbanza supera l'intervallo lineare, la dimensione del campione può essere aumentata o diluita prima della determinazione.

Esempio sperimentale:

1. Prelevare 0,05 g di mais per il trattamento del campione, prendi il surnatante, e quindi operare secondo le fasi di determinazione. Utilizzo 96 piastra a pozzo per misurare e calcolare ΔA′=AT-AB= 0.728-0.622 =0,195, curva standard y = 3,1829x + 0.002, calcolare x = 195. Contenuto di amido (mg/g di massa) = 1.351x×F÷W= 1.351×0.195 × 128÷0.05 = 674.4 mg/g di massa.

Riferimenti

• Clegg KM. Applicazione del reagente antrone alla stima dell'amido nei cereali[J]. Giornale della scienza dell'alimentazione e dell'agricoltura, 1956, 7(1):40-44.
• Viles Jr, Silvermann L. Determinazione dell'amido e della cellulosa con antrone [J]. Chimica Analitica, 1949, 21(8):950-953.

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