Stool or Soil Genomic DNA Extraction Kit

1. Componenti del kit di reagenti

2. Magazzinaggio

Questo kit di reagenti deve essere conservato a temperatura ambiente (15-25℃) e in condizioni asciutte, con una durata di conservazione di 12 mesi. Le colonne di purificazione per l'estrazione del DNA possono essere conservate per 1 anno in un ambiente fresco e asciutto. Lysozyme, Proteinasi K, E RNasi A contengono conservanti, consentendo il trasporto a temperatura ambiente, ma per la conservazione a lungo termine, dovrebbero essere mantenuti a -20 ℃.

3. Istruzioni per l'uso del kit di reagenti

3.1 Questo kit di reagenti è destinato alla ricerca di biologia molecolare e non deve essere utilizzato per la diagnosi o il trattamento di malattie.

3.2 Alcuni componenti del kit di reagenti contengono sostanze irritanti. Si raccomandano misure protettive come indossare indumenti protettivi e occhiali protettivi.

3.3 Durante l'utilizzo di questo kit di reagenti, una centrifuga ad alta velocità, bagnomaria (bagno di metallo), miscelatore a vortice, etanolo anidro, acqua deionizzata sterile, e le provette EP devono essere preparate dall'utente.

4. Introduzione al kit di reagenti

This kit provides a fast and efficient method for purifying microbial genomic DNA from soil, feces, and vomit samples. It is widely used for microbial DNA extraction from soil, feces, and vomit.

This kit effectively removes sample impurities and inhibitors, reducing inhibitory reactions in downstream experiments such as PCR. The entire purification process does not require toxic reagents such as phenol-chloroform. The extracted DNA can be directly used for PCR, Southernblotting, e altre applicazioni.

5. Principi e procedure sperimentali

6. Processo di estrazione

Prima di iniziare l'esperimento:

UN. Reagent Buffer IV può precipitare in condizioni di bassa temperatura. We recommend heating at 65℃for 5 minuti. Dopo che il precipitato si è sciolto, può essere utilizzato normalmente.

B. Prima dell'uso, add the specified amount of anhydrous ethanol to Tampone di lavaggio 1 as indicated on the bottle label. Contrassegnare un segno di spunta sull'etichetta per indicare l'aggiunta di etanolo anidro.

C. Il tampone di eluizione è un 0.1x soluzione TE containing minimal amounts of EDTA. Se l'EDTA potrebbe influenzare gli esperimenti successivi, it is advisable to substitute Elution Buffer with sterile deionized water.

1. Elaborazione del campione (Inhibitor Removal):

UN. Fecal and Vomit Samples: Add approximately 200mg of the sample to be extracted, aggiungere 1ml of Humic Acid Removal Reagent I, vortex thoroughly for 1-2 minuti, centrifugare a 12,000 giri al minuto per 2 minuti, scartare il surnatante, aggiungere 560μl of Buffer IV to the pellet, invert and mix thoroughly, digest at 85℃ for 5 minuti, capovolgere e mescolare 6-7 times during digestion, then proceed to step 2.

B. Soil Samples: Weigh approximately 0.1g-0.5g of sieved soil, aggiungere 500μl of Buffer IV and 100μl of Humic Acid Removal Reagent I, invert and mix thoroughly, digest at 85℃ for 5 minuti, capovolgere e mescolare 6-7 times during digestion, then proceed to step 2.

(Nota: Humic Acid Removal Reagent I/Humic Acid Removal Reagent II is mainly used for soils with high humic acid content, such as forest soils and sedimentary soils. Aggiungere 1ml of Humic Acid Removal Reagent I to the sample, vortex, shake for 1-2 minuti, centrifugare a 8,000 giri al minuto per 2 minuti, scartare il surnatante, then add 1ml of Humic Acid Removal Reagent II, vortex, centrifugare a 8,000 giri al minuto per 2 minuti, scartare il surnatante. This step can further reduce soil humic acid inhibitors but significantly reduce DNA yield.)

2. Centrifugare a 12,000 giri al minuto per 2 minuti, transfer the supernatant to a new centrifuge tube (approximately 500μl liquid transferred), add 20μl Proteinase K (10 mg/ml), 20μl Lysozyme, and 20μl RNase A, and incubate at 65℃ for 2 minuti.
3. Aggiungere un volume uguale di Reagente Buffer C plus (approximately 560μl liquid transferred) al lisato, mescolare bene. If a white precipitate appears, let it settle; it won’t affect subsequent experiments after the precipitate disappears.
4. Add an equal volume of ethanol to Reagente Buffer C plus (per esempio., aggiungere 560μl of Reagente Buffer C plus, then add 560μl of ethanol), mescolare bene. There may be precipitation, but it won’t affect subsequent experiments.
5. Add the obtained liquid to the DNA extraction purification column (sleeve) (circa 650-700μl ogni volta), centrifugare al massimo 8,000 giri al minuto per 1 minuto, smaltire il liquido di scarto raccolto, and reinsert the collection tube into the DNA extraction purification column (sleeve) per il passo successivo.
6. Aggiungere 400μl Inhibitor Removal Buffer, centrifugare al massimo 8,000 giri al minuto per 1 minuto, eliminare il liquido di scarto, and reinsert the DNA purification column into the sleeve for the next step.
7. Aggiungere 500μl Wash Buffer 1 alla colonna di purificazione per l'estrazione del DNA (sleeve), centrifugare a 14,000 giri/min (20,000× g) per 1 minuto.
8. Aggiungere 300μl Wash Buffer 1 again to the DNA extraction purification column (sleeve), centrifugare a 14,000 giri/min (20,000× g) per 2 minuti.
9. Posizionare la colonna di purificazione per l'estrazione del DNA (sleeve) in una nuova provetta da centrifuga, aprire il coperchio, and incubate at 65℃ for 2 minuti. This step can be extended if necessary to evaporate ethanol as much as possible to prevent ethanol residue from affecting downstream experiments.
10. Drip 100μl Elution Buffer sulla membrana, centrifugare a 12,000 giri al minuto per 2 minuti.

(Nota: 1. Eluting DNA with 50μl Elution Buffer can increase DNA concentration but reduce total DNA yield; 2. Il DNA eluito può essere riapplicato alla colonna di purificazione per l'estrazione del DNA, centrifuged again at 12,000 giri al minuto per 2 minuti, and collected to increase DNA yield.)