鳥類の性別識別核酸検出キット (PCR法)

• 商品番号： AN2206001
• 仕様：48T 100T

製品導入：

羽毛などのサンプルから特定の核酸断片を増幅できるキットです。, 血, さまざまな鳥の組織 (含む オウム目, ハダカ目, ガリ目, コウノトリ目, ハギ目, そしていくつかのアンセリ目), 使用して PCR.

抗阻害 2× Taq PCR マスター ミックスが含まれています (染料付き) PCRに必要なその他のコンポーネント. 増幅産物は、結果を決定するためにアガロースゲル電気泳動に直接かけることができます。.

商品内容：

保管条件：

-20℃で保存, 保存期間は少なくとも 12 月

サンプル処理:

動物ゲノム DNA 迅速抽出キットを参照してください。 (PCR分析用) サンシバイオ社の取扱説明書 (製品番号: DP202) サンプル処理用. 処理したサンプルを後で使用できるように保存します.

1. 実験運用：

• サンプルの準備 (サンプル準備エリア)
• 核酸抽出:
• の指示に従ってください。 “動物ゲノム DNA 迅速抽出キット (PCR分析用)” または、要件を満たす他の適切な核酸抽出キット/方法を使用します。. 処理されたサンプルから核酸を抽出します.
• 抽出した核酸はできるだけ早く検査することが最善です. 氷の上に置いておきます, すぐに使用しない場合は、4°C または -20°C で保管してください。.

2. 反応系の準備 (サンプル追加エリア)

2.1 反応混合物の調製:

• サンプル数に基づいて必要な試薬の量を計算します.
• 具体的な準備は以下の通り: ピペット (n× 7.5 試薬 C μL + n× 10 試薬 D μL + n× 1 試薬 E μL) 清潔な遠沈管に入れる. ピペッティングにより完全に混合します, そしてアリコート 18 μLを各ウェルに注入 0.2 mL PCRチューブ (遠沈管). (サンプルが多い場合, 事前に混合物を調製し、2～8℃で短期間保管します。; 内で使用する 2 時間。)

2.2 追加 2 抽出されたサンプル核酸 µL を各反応混合物に加える, チューブにキャップをする, 詳細を記録する, 合計ボリュームを 20 反応あたり µL. よく混ぜて遠心分離します 30 に置く数秒前 PCR装置 増幅用.

PCR増幅 (増幅および生成物分析エリア)

PCRプロトコル:

• 94℃での初期変性 3 分.
• 32 のサイクル: 94℃ 30 秒 (変性), 50℃ 45 秒 (アニーリング), 72℃ 50 秒 (拡大).
• 72℃で最終伸長 8 分, その後4℃に保ちます.
• 増幅産物を4℃で十分に冷却します。 (または -20°C で急速に約 5 分) のために 15 分.

アガロースゲル電気泳動(例として水平アガロースゲル電気泳動を使用する)

4.1 ジェルの準備:

キャストするジェルの量とジェルの濃度に応じて (1%~1.5%), 適切な量​​の電気泳動バッファーを測定します。 (TAE または TBE, それぞれ製品番号 DA001 または DA002, または要件を満たす同等の製品), そして三角フラスコに注ぎます.

注記: ゲルキャスティングバッファーと電気泳動バッファーは一貫している必要があります.

4.2 アガロースの重量を慎重に測定します (製品番号: DA003, または同等のブランド), そしてそれをフラスコに加えます. フラスコをクッキングシートまたはシールフィルムで覆い、電子レンジで加熱してアガロースを溶解します。. 沸騰するまで加熱する, 耐熱手袋を着用する, フラスコをゆっくりと旋回させます. アガロースが完全に溶解するまで繰り返します.

注記: アガロースの溶解プロセスでは、溶液の過熱や沸騰を防ぐために、短時間の沸騰を複数回行う必要があります。. 電気泳動画像が不鮮明になるのを避けるために、アガロースが完全に溶解していることを確認してください。.

4.3 核酸色素を添加する (製品番号: DA004, または同等のブランド) 完全に溶解したアガロースに.

4.4 アガロース溶液をゲルキャストトレイに注ぎ、適切な位置にコームを挿入します. ゲルの厚さは次の範囲にする必要があります。 3 に 5 んん.

4.5 ゲルが室温で固まるまで待ちます (について 30 分まで 1 時間). 慎重にコームを取り外し、電気泳動バッファーがあらかじめ満たされている電気泳動タンクにゲルを置きます。.

電気泳動とサンプルローディング:

4.6 負荷 5 DNA マーカー µL (製品番号: DA005, または同等のブランド) そして 10 冷却した増幅産物 µL をウェルに注入. すべてのサンプルをロードした後, 立ってみましょう 2 電源を入れる数分前. 電圧を設定する (70-120V) そして実行時間 (20-30 分) 条件に応じて.

結果の解釈

結果の決定:

• 単一のバンドが約 700 血圧, サンプルは男性であると判定される.
• 700bp と 400bp 付近に 2 つの増幅されたバンドが表示される場合 (または 400bp 付近に増幅されたバンドが 1 つだけ表示される), サンプルは女性であると判明.
• バンドが表示されない場合, 鳥の性別を識別するための特定の遺伝子はサンプルから検出されませんでした. 核酸の抽出と増幅をやり直すか、メーカーのテクニカル サポートに問い合わせることをお勧めします。.

予防：

• 汚染を防ぐために, 実験は厳密に分割する必要があります, 人的要因による相互汚染を避けるため、異なるゾーン間を物理的に隔離. 実験中は白衣とラテックス手袋を着用してください, 異なる領域で別々のツールを使用する. エリア間を移動するときは手袋と白衣を交換する必要があります.
• 試薬は使用前に完全に解凍する必要があります, ただし、凍結融解サイクルを繰り返すことは避けてください。. 試薬の調製とサンプルの添加については指示に厳密に従ってください。. 作業台, 遠心分離機, ピペット, その他の器具は塩素含有消毒剤を使用して定期的に消毒する必要があります。, エタノール, 核酸除染剤, またはUVランプ.
• PCR反応終了後, すぐに蓋を開けないでください. エアロゾル汚染を可能な限り避けるため、開封する前に十分に冷えるまで待ってください。.
• このキットは、一部のスズメ目以外の鳥の特定の遺伝子を増幅するためにのみ使用されます。 (家禽), その他の関連商品については, サンリバイオにご相談ください. この製品は科学研究のみを目的としており、臨床診断やその他の目的を意図したものではありません。.