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製品導入：
This test kit is designed to amplify and detect the conserved gene of the Psittacine Beak and Feather Disease Virus (PBFDV) 鳥の羽などのサンプルに含まれる, 血, 組織, oral swabs, and cloacal swabs. Introducing an endogenous internal reference, it allows for monitoring of the nucleic acid extraction and amplification processes, ensuring the accuracy of the detection results.
商品内容：
| 試薬成分 | AP2304002-01（24T） | AP2304002-02（48T） |
| PBFDV reaction solution | 23μL/ウェル×8ウェル/ストリップ×3ストリップ | 23μL/ウェル×8ウェル/ストリップ×6スチップ |
| PBFDV Positive control | 100μL | 100μL |
| ネガティブコントロール | 100μL | 100μL |
保管条件：
-20℃で保存, 保存期間は少なくとも 12 月
実験運用：
1. サンプルの準備 (サンプル準備エリア)
1.1 サンプル要件：
羽毛: 最低限のものを集める 5 胸から羽が出る, 腹部, または足 (羽根軸部分を含む), 自然に抜け落ちた羽毛は使用しません。.
血: 抗凝固剤としてEDTAを使用する, ヘパリンを抗凝固剤として使用しないでください. 新鮮な全血を使用する必要があります, または2~8℃で最長保存可能 7 日々, または-20℃で最長保存 3 月. 凍結と融解を繰り返すことはできるだけ避けてください。.
組織: 新鮮な筋肉または臓器組織を採取する (皮膚のあるサンプルの使用を避ける, 腱, 加工が難しい筋膜や) 100mg以下. 200～500μLの滅菌水を使用して組織ホモジネートを調製します, その後、次のサンプル前処理に進みます。.
1.2 サンプルの準備：
Three Lions Biotech のマニュアルを参照してください。 “動物ゲノム DNA 迅速抽出キット (のために PCR 分析)” (部品番号: DP202), または関連要件を満たすその他の核酸抽出キット/方法, 加工サンプルの抽出用. 抽出したサンプル核酸をアイスボックスに入れ、速やかに検査を続行してください。. 4℃で最長3年間保存可能 7 数日または -20°C で最長 6 月.
2 . 反応系の準備 (サンプルを追加するための反応エリア).
2.1 Remove n+2 reaction tubes (n representing the number of test samples) containing PBFDV positive control, ネガティブコントロール, and the required PBFDV reaction solution. 試薬を室温で完全に解凍します。, 遠心分離機用 10 秒, and then centrifuge the liquid inside the tube walls and caps to the bottom. Store the tubes in an icebox for later use.
2.2 Add 2μL of negative control, 抽出されたサンプル核酸, and PBFDV positive control in sequence to the reaction solution. Close the tube caps tightly, make necessary records, and ensure that each reaction has a total volume of 25μL. Thoroughly mix the contents and centrifuge for 10 seconds before conducting the amplification experiment on the PCR装置.
3. PCR増幅 (増幅および生成物分析エリア).
PCR増幅プロセスは次のとおりです。: 95℃で予備変性 3 分; 95℃で変性 10 秒, 60℃でアニーリングと延伸を行います。 40 秒, 合計で 35 サイクル. 60℃で蛍光シグナルを収集. 蛍光検出では, 最初のチャンネルに FAM を選択します (for APV-specific gene), 2 番目のチャンネルに VIC/HEX を選択します (内因性参照遺伝子用). ABIシリーズリアルタイム蛍光定量PCR装置を使用する場合, 事前にメーカーに問い合わせるか、必要に応じて自分で ROX キャリブレーション色素を追加することもできます; さもないと, 通常の手順に従ってください.
4. 結果の判定
4.1 FAM チャネルと VIC/HEX チャネルの両方のポジティブ コントロールの Ct 値が <30 そして、 “S”-整形された増幅曲線, ネガティブコントロールには Ct 値がないか、Ct 値が 35 以上であり、 “S”-整形された増幅曲線, 実験結果は有効です. さもないと, 実験は繰り返されるべきだ, 繰り返し実験がまだ無効である場合, 技術担当者にお問い合わせください.
4.2 VIC/HEX チャンネルのサンプルの Ct 値は ≤32 であり、 “S”-整形された増幅曲線, サンプルの抽出と増幅が効果的であることを示しています. Ct値が無い場合、またはCt値が 32 < CT ≤ 35 VIC/HEX チャンネル内, サンプルの核酸抽出が標準に達していない、または強い阻害干渉があることを示します。 (アルコールや消毒剤の残留物など, 抗凝固剤, 等) 増幅を阻害するもの. 核酸の抽出と増幅のためにサンプルを再処理することをお勧めします。.
4.3 VIC/HEX チャンネルの検出が有効になった後, FAM チャネルでの決定は次のように実行されます。:
- Ct値≦ 32 そして “S”-整形された増幅曲線が観察される, APV陽性と判定される, サンプル中にAPVウイルスが存在することを示す.
- Ct値は 32 < CT < 35, it is considered suspicious, そしてサンプルは再検査されるべきです (核酸を再抽出して検査することにより, 最初に除外することをお勧めします “偽陽性” 環境エアロゾル汚染によって引き起こされる結果). エアロゾル汚染を除外した後の FAM チャンネルでの再検査で Ct 値が示された場合 < 35 明確な増幅曲線, APV陽性と判定される; さもないと, 陰性と判定される.
- Ct値なし、またはCt値≧ 35 そしていいえ “S”-整形された増幅曲線, APV陰性と判定される, APV ウイルスがサンプルから検出されなかったことを示します.
予防：
1）To prevent contamination, 実験は厳密に分割された操作で実行する必要があります. 人的要因による相互汚染を避けるために、パーティション間を物理的に隔離することが望ましい. 実験中は白衣とラテックス手袋を着用してください, 異なる領域で別々のツールを使用する. 必要に応じて手袋と白衣を交換します. PCR後, すぐに蓋を開けないでください. エアロゾル汚染を最小限に抑えるため、サンプリングのために開ける前に十分に冷却するまで待ってください。.
2）Thaw the reagents completely before use, ただし、凍結と融解を繰り返すことは避けてください。. 試薬の調製については指示に厳密に従ってください, サンプル追加, およびその他の手順. 作業台, 遠心, ピペット, その他の器具は塩素含有消毒剤を使用して定期的に消毒する必要があります。, エタノール, 核酸汚染除去剤, または紫外線ランプ.
3）A negative result does not necessarily mean a male. 未知の突然変異, サンプルの品質が悪い, 低濃度, または核酸抽出における強力な阻害物質の存在 (テスト) につながる可能性もあります “ネガティブ” 結果. このキットは、オウムの CHD-W 遺伝子の特異的増幅のみに使用されます。. その他の製品について, メーカーにご相談ください.
4）This product is for single use only. 凍結と融解を繰り返さないでください. 科学研究のみを目的としており、臨床診断やその他の目的には使用しないでください。.
