サンシビオ 2× プローブ qPCR ミックス

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説明

2× プローブ qPCR ミックス

商品番号EH002 仕様:1mL Storage: -20℃で保存

製品導入

This product is a specialized reagent for Real-Time qPCR using the probe method. It contains an antibody-blocked hot-start enzyme that effectively suppresses non-specific amplification caused by primer misannealing or primer dimer formation at low temperatures, thereby enhancing the specificity of the amplification reaction. This product exhibits high amplification efficiency and detection sensitivity, allowing for the generation of a robust standard curve across a broad quantification range, 正確な定量化を可能にする. さらに, it is compatible with various fluorescence quantitative PCR instruments, Applied Biosystems 製のものを含む, エッペンドルフ, バイオラッド, ロッシュ, その他国内ブランド.

商品内容:

コンポーネントEH002-02
2× プローブ qPCR ミックス1mL

注記ROX Reference Dye can be obtained separately or through the manufacturer to correct inter-well fluorescence signal discrepancies in certain company’s Real-Time PCR amplifiers. ROX Reference Dye I is suitable for ABI PRISM 7000/7700/7300/7900HT and Step One Plus Real-Time PCR Systems, 等. ROX Reference Dye II is suitable for 7500 リアルタイムPCRシステム, 7500 高速リアルタイム PCR システム, ストラタジーン MX3000P, MX3005P, およびMX4000, 等. The final concentration of ROX Reference Dye I and II is 1×. Real-time fluorescence quantitative PCR amplifiers such as LightCycler, サーマルサイクラーダイスリアルタイムシステムⅡ, およびスマート サイクラー システムでは、ROX 参照色素を使用する必要はありません。.

ストレージ:

-20℃で保存, 最低保存期間は 12 月.

アクティビティの定義:

活性化されたマヒマヒ精子 DNA をテンプレート/プライマーとして使用する, アクティビティは次のように定義されます 1 ユニット (U) 酸不溶性物質が組み込まれている, 取り上げることで 10 ヌクレオチドの nmol 30 74℃で5分.

品質管理:

この製品は品質検査を受けており、デオキシリボヌクレアーゼ・エンドヌクレアーゼ活性を含んでいません。, デオキシリボヌクレアーゼ エキソヌクレアーゼ活性, リボヌクレアーゼの汚染. 宿主ゲノムDNA残存量は以下の通り 10 コピー.

製品の用途:

Real-time fluorescence quantitative singleplex or multiplex (2-4 チャンネル) qPCR (probe method) amplification of DNA or cDNA; absolute quantification qPCR.

使用説明書:

  • Equilibrate the required reagents at room temperature until fully dissolved, gently mix well (ボルテックスしないでください), use after a brief centrifugation to prevent excessive bubble formation, and avoid repeated freeze-thaw cycles. 頻繁に使用する場合, 4℃で保存. Prepare the PCR reaction mixture according to the components listed below (prepare the reaction mixture on an ice box):
試薬25μLSystem Volume最終濃度
2× プローブ qPCR ミックス12.5μL
プライマーI (10μM)0.5-2.5μL0.2-1.0μM
ファーストⅡ (10μM)0.5-2.5μL0.2-1.0μM
プローブ (10μM)0.25-1μL
ROX 参照色素 I または ROX 参照色素 II0.5μLまたは0.25μL
テンプレートDNA1-5μL
ああ225μLまで

注記:The amounts of each component in the reaction system can be adjusted according to actual requirements. Users need to decide whether to add ROX Reference Dye based on the actual model being used.

  • 一般的に, 反応には二段階法を使用できます; if the two-step amplification is not satisfactory, a three-step method can be used to set up the PCR reaction program.
方法・手順2段階リアルタイムPCR3 ステップのリアルタイム PCRサイクル
95℃ (変性前)2-5分2-5分1
95℃ (変性)10-20秒10-20秒35-45サイクル
55℃~65℃ (アニーリング)20秒 – 1min(蛍光を収集)10-20秒
72℃ (拡大)20秒 – 1min(蛍光を収集)

注記: Reaction conditions can be adjusted and optimized according to actual requirements.

  • 反応が完了した後, analyze the experimental results. For detailed analysis methods, refer to the PCR amplification instrument operating manual.

予防:

  1. The concentration of the primers used can be adjusted within the range of 0.2-1.0 μM, and the DNA template can be appropriately adjusted based on its concentration.
  2. Choose an appropriate annealing (拡大) temperature based on the primer design. 通常, the Tm value of the primers is designed to be around 60°C. For primers with lower annealing temperatures or for amplifying long fragments exceeding 200 血圧, 3 段階の方法が推奨されます.
  3. The concentration of the probe used can be optimized within the range of 0.1-0.4 μM. Conduct experiments with gradient concentrations to find the optimal combination of primers and probes. The use of probes depends on the Real Time PCR instrument, probe type, and fluorescent label type. Refer to the instrument manual or specific requirements for each fluorescent probe for adjustments.
  4. Use dedicated areas and pipettors before and after amplification, 手袋を着用する, そして頻繁に変更する. After PCR amplification, do not open the reaction tubes directly. Place them at 4°C or -20°C to cool sufficiently before opening to minimize the risk of PCR product contamination in the experimental environment.

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