BCA (ビシンコニン酸) プロテインアッセイキットは、サンプル中のタンパク質濃度を定量するために広く使用されている方法です. このアッセイは銅の比色検出に依存しています。(Ⅱ) アルカリ条件下でタンパク質によって還元されるイオン. 得られる紫色の強度はタンパク質濃度に比例します。, 正確な定量化が可能.
の使用方法に関する一般的なガイドは次のとおりです。 BCAプロテイン アッセイキット:
必要な材料:
- BCAタンパク質アッセイキット
- タンパク質サンプル (標準溶液または未知のサンプル)
- マイクロプレートまたはキュベット
- マイクロピペットとチップ
- マイクロプレートリーダーまたは分光光度計
- 蒸留水
手順:
- タンパク質標準物質の調製:
- 既知の濃度で一連のタンパク質標準物質を調製します. これらの標準は、定量用の標準曲線を作成するために使用されます。.
- サンプルの調製:
- タンパク質サンプルを標準の範囲内の濃度に希釈します。. 正確な定量のためには、サンプルがアッセイの線形範囲内にあることが重要です.
- BCA作用試薬の調製:
- BCA試薬Aを混合する (ビシンコニン酸溶液) およびBCA試薬B (銅(Ⅱ) 硫酸塩溶液) で 50:1 比率. 完全に混合してください.
- インキュベーション:
- BCA Working Reagent を標準およびサンプルに追加します, その後、反応混合物を適切な温度でインキュベートします (通常37℃) のために 30 分. この間, サンプル中のタンパク質は銅イオンを減少させます, 紫色の複合体を形成する.
- 測定:
- 孵化後, およその波長で各ウェルの吸光度を測定します。 562 マイクロプレートリーダーまたは分光光度計を使用したnm. 吸光度はタンパク質濃度に正比例します.
- 標準曲線の作成:
- 標準の吸光度を既知の濃度に対してプロットして、標準曲線を作成します。. この曲線は、未知のサンプルのタンパク質濃度を決定するために使用されます。.
- 未知のサンプルの定量化:
- 未知のサンプルの吸光度を測定し、標準曲線を使用してタンパク質濃度を決定します。.
- データ分析:
- 標準曲線に基づいてタンパク質濃度を計算します. ほとんどのマイクロプレート リーダーには、このプロセスを自動化できるソフトウェアが搭載されています。.
- 結果:
- サンプルのタンパク質濃度を適切な単位で報告します (例えば, mg/mL) BCAアッセイに基づく.
BCA タンパク質アッセイ キットの製造元が提供する特定の指示に従うことが重要です, 正確なプロトコルはキットによって異なる場合があるため. さらに, すべての試薬が適切に保管されていることを確認してください, アッセイは、正確で信頼性の高い結果を得るために推奨される条件下で実行されます。.
BCA タンパク質アッセイ キットは、タンパク質が Cu2+ を Cu+ に還元することと、BCA がアルカリ条件下で Cu1+ と紫青色の複合体を形成するという原理に基づいています。, 続いて562nmでの吸光度を検出し、標準曲線と比較してタンパク質を定量します。.
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