ソーラーバイオホルムアルデヒドデヒドロゲナーゼ (FDH) 活性アッセイキット (動物サンプル)

商品情報

カタログ番号: BC4980

仕様: 50T/48S

キットのコンポーネント

• 抽出液: 60 mL× 1 ボトル, 2～8℃で保存
• 試薬 1: 35 mL× 1 ボトル, 2～8℃で保存
• 試薬 2: パウダー× 2 バイアル, -20℃で保存
• 試薬 3: パウダー× 2 バイアル, 2～8℃で保存
• 試薬 4: 3 mL× 1 ボトル, 2～8℃で保存

溶液の準備

1. 試薬II: 追加 0.25 使用前に蒸留水 mL. 未使用の試薬は-20℃で2週間保存してください。.
2. 試薬 II の作業溶液: 検査に必要な金額に応じて, 試薬 II の比率に従って作業溶液を調製します。 (μL): 蒸留水 (μL) =1:29, 試薬を使用するときに準備します. 試薬 II の作業溶液は、同日に調製した場合はその日のうちに使い切る必要があります。.
3. 試薬Ⅲ: 追加 1.5 使用前に蒸留水 mL. 十分に混ぜ合わせてください. 未使用の試薬は-20℃で2週間保存してください。

製品説明

ホルムアルデヒドデヒドロゲナーゼはほとんどの原核生物とすべての真核生物に存在します. ホルムアルデヒドを分解する酸化還元酵素です. ホルムアルデヒドデヒドロゲナーゼはホルムアルデヒドと NAD+ を触媒して NADH を生成します. での吸光度 340 nmは増加します. 340nmでの変化を測定することで, ホルムアルデヒドデヒドロゲナーゼの活性を計算することができます.

ノート:

1. 選択することをお勧めします 2-3 実験前の事前実験で大きな差が予想されるサンプル. サンプルの吸光度が測定範囲外の場合, 検出にはサンプル量を希釈するか増やすことをお勧めします。.

必要な機器と消耗品:

• 紫外分光光度計
• 低温遠心分離機
• 恒温槽・ウォーターバス
• 調整可能なピペット
• 1 mL石英キュベット
• 乳鉢・ホモジナイザー
• 氷と蒸留水

操作手順:

私. サンプル処理 (検査するサンプルの量を適切に調整できます, 特定の比率を参照できます)

• 組織: 動物組織の重量比による (g): 抽出液の量 (mL) = 1:5~10 (重さを量ることをお勧めします 0.1 動物組織 1 g を加えて 1 抽出溶液 mL), 氷浴中で均質化する, で遠心分離する 8000 g, 4℃ 10 分; 上清を取る (上清が十分に透明でない場合, 上記の遠心分離ステップを繰り返すことをお勧めします。) テストのために氷の上に置きます.

Ⅱ. 決定手順

1. UV 分光光度計を少なくとも 1 分間予熱します。 30 分, 波長を調整して 340 nm, 蒸留水でゼロにする.
2. 試薬 1 と試薬 4 を 37°C で予熱します。 10 使用の数分前.
3. で 1 mL石英キュベット, 追加 100 サンプルのμL, 550 試薬 1 μL, 250 試薬 2 の作業溶液 μL, 50 試薬 3 μL, そして 50 μL の試薬 4 を順番に. 直ちに完全に混合し、吸光度 A1 を測定します。 340 nmの 20 秒. 37°C のウォーターバスまたはインキュベーターに入れて、 5 反応するまでの分, すぐに取り外して乾拭きしてください, 5分20秒で吸光度A2を測定します。. 吸光度 A1 を記録します。 340 nmの 20 秒とその後の吸光度A2 5 分. ΔA = A2 を計算します。 – A1.

Ⅲ. 動物組織におけるFDH活性の計算

1. サンプルに基づく計算 タンパク質濃度:

単位の定義: 酵素活性の 1 単位は、酵素を触媒する酵素の量として定義されます。 の生産 1 組織タンパク質 1 mg あたり、1 分あたりの NADH の nmol.