グリコーゲンアッセイキット

注記: テスト前に予測のために 2 つまたは 3 つの異なるサンプルを取得します.

操作装置: 分光光度計/マイクロプレートリーダー

カタログ番号: BC0345

サイズ:100T/96S

コンポーネント:

抽出試薬: 100mL×1, 4℃で保存.

摂政一世: パウダー×1, 4℃保存、ブドウ糖10mg, 追加 1 使用前に溶解するための蒸留水 mL. 蒸留水で希釈すると、 0.1 スタンバイ用 mg/mL ブドウ糖溶液, 使用する準備ができて. 0.1 mg/mL ブドウ糖標準液, 4℃で保存.

リーゼントⅡ: パウダー×1, 4℃で保存.

実用的なソリューション: 注ぐ 6 試薬Ⅱに蒸留水 mL を加えゆっくりと注ぎます。 24 濃硫酸 mL. 使用前によく溶かしてよく混ぜてください. 未使用の試薬は次の時点で有効です。 4 ℃で1週間.

製品説明

グリコーゲンはグルコース単位で構成される高分子多糖類です. 砂糖の主な貯蔵形態の1つです. 主に肝臓と筋肉にバックアップエネルギーとして蓄えられます。, 肝臓グリコーゲンと筋グリコーゲンと呼ばれます, それぞれ. グリコーゲンは血糖濃度を調節することができます. 血糖値が上昇すると肝臓でグリコーゲンが合成される. 血糖値が下がると, 肝臓のグリコーゲンは血糖を補うためにブドウ糖に分解される. したがって, 肝臓のグリコーゲンは血糖の相対的なバランスを維持するために重要です. 筋グリコーゲンは筋肉内のグリコーゲン貯蔵の一種です. 激しい運動で血糖値が大量に消費されると、, 筋グリコーゲンは血糖に直接分解されない. 乳酸を生成するにはまず分解する必要があります, 血液とともに肝臓に循環される, グリコーゲングルコースを経て肝臓グリコーゲンに変換されます.

決定原理: アンスロン法. 強アルカリ抽出液でグリコーゲンを抽出, グリコーゲン含有量は強酸性条件下でアンスロン法により測定されます。.

必要だが提供されていない試薬と装置.

S分光光度計/マイクロプレートリーダー, 卓上遠心分離機, 移送ピペット, マイクロガラスキュベット/96ウェルプレート, モルタル, 濃硫酸 (H2SO4) と蒸留水.

手順:

私. サンプル抽出:

1. 細胞とか細菌とか: 集める 5-10 数百万の細菌または細胞を遠心分離管に入れる, 遠心分離後上清を廃棄します; 0.75mLの抽出試薬を加えて超音波で細菌や細胞を破壊します (力 20% または200W, 超音波3s, 10秒間隔, 繰り返す 30 回) ); 10mLチューブに移す, 沸騰水浴で20分間煮る (水分の損失を防ぐためにしっかりと閉めてください), チューブを毎回振る 5 完全に混合するまでの分; チューブを取り出して冷ます, 蒸留水で5mLまで取り、混合します。. 8000g、25℃で10分間遠心分離, 検査のために上清を採取する.

2. 組織: サンプルを0.1～0.2g秤量し、容器に入れます。 10 mLチューブ, 追加 0.75 抽出液 mL, 沸騰水浴で沸騰させる 20 分 (水分の損失を防ぐためにしっかりと閉めてください), 試験管を毎回振る 5 完全に混合するまでの分. 組織がすべて溶けた後, チューブを取り出して冷まします, それから補う 5 蒸留水で mL. 8000g、25℃で遠心分離 10 分, 検査のために上清を採取する.

Ⅱ. 決定 手順:

1. 予熱する s分光光度計/マイクロプレートリーダー用 30 分, 波長を調整して 620 nm, 蒸留してゼロを設定する
2. サンプリングテーブル (EPtube に次のリージェントを追加します)

よく混ぜます, 沸騰した湯の中に入れて、 10 分 (水分の損失を防ぐためにしっかりと閉めてください), いいね, そしてとる 200 μLをマイクロガラスキュベット/96ウェルプレートに注入し、ブランクチューブの吸光度を読み取ります。, 標準チューブ, と測定管の 620 nm, それらをA1として記録します, A2, そしてA3. ブランクチューブと標準チューブのテストは 1 回だけで済みます.

Ⅲ. 計算:

1. サンプル重量

ソルビトール (mg/g 生体重) =(Cs×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)÷1.11

= 0.450×(A3-A1)÷（A2-A1)÷W

2. タンパク質濃度

ソルビトール (mg/mgプロット) = (Cs×V1)×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷(V1×Cpr) ÷1.11

=0.09×(A3-A1) ÷（A2-A1) ÷心肺蘇生法

3. 細菌または細胞の数:

ソルビトール（mg/104細胞）= (Cs×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(細菌または細胞の数×V1÷V2) ÷1.11

= 0.450×(A3-A1)÷（A2-A1)÷細菌または細胞の数

1.11: グルコース含有量がグリコーゲン含有量に換算される定数です, あれは, の色 111 アントロン試薬を含むグルコース μg は、 100 アントロン試薬を含むグリコーゲン μg.

Cs: 標準濃度, 0.1 mg/mL V1: サンプル量, 0.06 mL;

V2: 総サンプル量, 5 mL;

心肺蘇生法: サンプルタンパク質濃度, mg/mL; W: サンプル重量, g

細菌または細胞の数: 104 ユニットとして, 万

注記:

A がより大きい場合 1.4, サンプルを蒸留水で希釈し、計算式の対応する希釈係数を掛けます。.

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技術仕様:

検出限界: 0.002 mg/mL

直線範囲: 0.003125-0.25 mg/mL