ソーラーバイオ マロンジアルデヒド (MDA) コンテンツアッセイキット

マロンジアルデヒド (MDA) コンテンツアッセイキット

注記: 予測する必要がある 2-3 正式な決定前の大きな差異のサンプル. 操作装置: 分光光度計.

カタログ番号: BC0020

サイズ: 50T/48S

コンポーネント:

注記: MDA 検出用の実用溶液は溶解しにくい, 70℃に加熱し、激しく振動させることで溶解を促進します。. または超音波処理により溶解を促進します。.

製品説明:

• 過酸化脂質は、酸素フリーラジカルと不飽和脂肪酸の相互作用によって生成されます。, 最終的にはマロンジアルデヒドなどの化合物を形成します (MDA). 脂質の過酸化レベルが指標として機能します, MDAレベルを測定することで評価できます.
• 酸性・高温条件下, 茶色がかった赤色の化合物, 3,5,5-3 メチル スルファメトキサゾール-2,4-2 ケトン, MDAとチオバルビツール酸の縮合反応によって合成されます (未定). この化合物は次の温度で最大吸収を示します。 532 nm. 脂質過酸化の評価には比色分析が含まれます. しかし, 可溶性糖の存在は検出プロセスを妨げる可能性があります. 可溶性糖とTBAの反応により、次の吸収波長で呈色反応が生じます。 450 nmと 532 nm. このアッセイキットでは, MDA 含有量は、次の吸光度の変化によって決まります。 532 nm, 450 nm, そして 600 nm.
• 植物組織にはスクロースが、動物組織にはグルコースが存在するため, キットにはスクロースとグルコースに合わせた 2 つの計算式が含まれています. これらの式は脂質評価に適しています.

必要だが提供されていない試薬と装置:

分光光度計, 水浴, 卓上遠心分離機, 移送ピペット,1 mLガラスキュベット, モルタル/ホモジナイザー, 氷と蒸留水.

手順:

私. サンプルの準備:

細菌とか細胞とか:

細菌や細胞を遠心管に集めます. 5 数百万の細菌や細胞が混合される可能性があります 1 抽出試薬 mL. 超音波を使用して細菌と細胞を分割します。 (氷の上に置かれた, 超音波出力200W, 超音波時間 3 秒, 間隔 10 秒, 繰り返します 30 回). で遠心分離します。 8000 ×gの場合 10 4℃で3分間不溶物を除去, 試験前に上清を氷上で採取します.

組織:

0.1 gの組織を混ぜることができます 1 抽出試薬 mL を加え、氷浴上で完全に均質化. 次に、次の温度で遠心分離します。 8000 ×gの場合 10 4℃で3分間不溶物を除去, 試験前に上清を氷上に置きます.

血清:

検出する

Ⅱ. 決定 手順:

1. 分光光度計を以上予熱します 30 分, 蒸留してゼロを設定する
2. 次のリストを使用して試薬を追加します:

混合物は100℃で2時間インキュベートされます。 60 分 (湿気の損失を防ぐためにしっかりと閉じてください), 氷上で冷やした, で遠心分離した 10000 ×gの場合 10 室温で数分間、不溶性物質を除去します. 上清を取り込みます 1 mLガラスキュベット, で吸光度を測定します。 450 nm, 532 nmと 600 nm.

ΔA450=A450(T)-A450(B), ΔA532=A532(T)-A532(B), ΔA600 =A600(T)-A600(B). 空のチューブは 1 〜 2 回テストする必要があります.

Ⅲ. 計算:

1. 組織, 細菌または培養細胞

• タンパク質濃度:

MDA (nmol/mgプロト)=(6.45×(ΔA532～ΔA600)-1.29×ΔA450)×Vrv÷(心肺蘇生×対比)

=5×(6.45×(ΔA532～ΔA600)-1.29×ΔA450)÷心肺蘇生法

• サンプル重量:

MDA (nmol/g重量)=( 6.45×(ΔA532～ΔA600)- 1.29×ΔA450)×Vrv÷(W×Vs÷Vsv)

=5×(6.45×(ΔA532～ΔA600)- 1.29×ΔA450)÷W

• セラマウント:

MDA (nmol/104細胞)=( 6.45 ×(ΔA532～ΔA600)- 1.29×AΔ450)×Vrv÷(400×Vs÷Vsv)

=0.01×(6.45×(ΔA532～ΔA600)- 1.29×ΔA450)

• 血清:

MDA (nmol/mL)=(6.45×(ΔA532～ΔA600)-1.29×ΔA450)×Vrv÷Vs

=5×(6.45×(ΔA532～ΔA600)-1.29×ΔA450)

2. 植物組織:

• サンプル重量

MDA (nmol/g重量)= (6.45×(ΔA532～ΔA600)-0.56×ΔA450)×Vrv÷(W×Vs÷Vsv)

=5×(6.45 ×(ΔA532～ΔA600)- 0.56×ΔA450)÷W

• タンパク質濃度:

MDA (nmol/mgプロト)=( 6.45 ×(ΔA532～ΔA600)- 0.56×ΔA450)×Vrv÷(心肺蘇生×対比)

=5×(6.45 ×(ΔA532～ΔA600)- 0.56×ΔA450)÷心肺蘇生法

ロープ: 総反応量, 1 mL; 対: サンプル量, 0.2 mL;

VSv: 抽出量, 1 mL;

心肺蘇生法: サンプルタンパク質濃度, mg/mL; W: サンプル重量, g;

400: 細菌と細胞の総数, 5 百万.

注記:

サンプルの吸光度値が低すぎることが判明した場合, 沸騰水浴時間は以下から調整できます。 60 分まで 90 分以上. エラーを避けるために、同じ実験での MDA の検出を同じ時間まで延長する必要があります.

参考文献

• スピッツ DR, オバリー L W. 哺乳類組織ホモジェネートにおけるスーパーオキシドジスムターゼ活性のアッセイ[J]. 分析生化学,1989
• マサヤス・マサヤス, Y ヒロシ. 臨床用スーパーオキシドジスムターゼ活性の簡易測定法[J]. 化学クリニック

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