Solarbio 総抗酸化力 (T-AOC) アッセイキット

総抗酸化力 (T-AOC) アッセイキット

注記: テスト前に予測のために 2 つまたは 3 つの異なるサンプルを取得します.

操作装置: 分光光度計

カタログ番号: BC1310

サイズ：50T/48S

コンポーネント:

抽出液: 液体 50 mL×1. 4℃で保存, 使用前に予冷してください.

試薬I: 液体 35 mL×1. 4℃で保存.

試薬II: 液体 20 mL×1. 4℃の日陰で保管.

試薬Ⅲ: 液体 5 mL×1. 4℃の日陰で保管.

標準: パウダー×1, 10 FeSO4・7H2O mg. 実用的なソリューション: 追加 0.9 蒸留水 mL と濃硫酸 20μL (H2SO4) フォームへ 40 μmol/mL FeSO4標準液. 溶液混合物 (溶液をいつ使用するかを準備する): 試薬I : 試薬II: 試薬III= 7:1:1, 使用前に37℃でインキュベートしてください.

製品説明:

このキットは、サンプル中の抗酸化物質および抗酸化酵素の総抗酸化レベルを検出するために使用されます。. 主に生物学の研究に使用されます, 抗酸化溶液の総抗酸化能力を検出するための医学および薬学研究.

酸性環境下では, Fe3+ -TPTZ は青色の Fe2+ -TPTZ に還元されます. 発色反応は総抗酸化力を反映します.

必要だが提供されていない試薬と装置:

分光光度計, 恒温水槽, 低温遠心分離機, 1 mL ガラスキュベットと蒸留水.

手順:

私. サンプルの準備:

1. 血清, プラズマ, 唾液, または尿サンプル

プラズマ (ヘパリンまたはクエン酸ナトリウムによる抗凝固療法, EDTAの使用を避ける), で遠心分離する 5000 rpm/分 10 分, 検査のために上清を採取する. 血清を摂取する, 直接測定のための唾液または尿サンプル. また, -80℃で保存し、以内であれば検出可能 30 日々.

2. 細胞または組織 サンプル

取る 1-2 100万個の細胞または 0.1 組織グラム, 追加 1.0 抽出液 mL. ホモジネートまたは超音波を使用して細胞を完全に破壊し、抗酸化物質を放出します。, で遠心分離する 10000 r/min、4℃ 5 分, 検査のために上清を採取する. 必要に応じてタンパク質の濃度を測定します.

Ⅱ. 決定手順:

1. 希薄 40 μmol/mL FeSO4標準溶液～ 0.1, 0.05, 0.025, 0.0125, 0.00625, 0.003125 μmol/mL, 取る 500 標準液 μL (ブランクコントロール用の蒸留水), に追加 500 試薬 II μL. 十分に混ぜ合わせてください 10 分, の吸光度を検出する 593 nm, ΔA=AS-ABを計算します. (として: 標準液チューブ, AB: ブランクコントロールチューブ。) Fe2+ の最終濃度は次のとおりです。 0.05、0.025、0.0125、0.00625、

0.003125、0.00156 μmol/mL.

2. 分光光度計を予熱します 30 分, 波長を調整して 593 nm を蒸留してゼロに設定します
3. 次のリストを使用して試薬を追加します:

Ⅲ. 計算:

1. 標準曲線の作成

Fe2+の最終濃度をX軸にとります, △AをY軸とする, 標準曲線を作成する, 線形回帰式 y=kx+b を取得します。, ΔAを取る’ 方程式に代入して x を取得します (μmol/mL).

2. 単位の定義: サンプルの抗酸化能力は、同じ吸光度の変化に必要な標準液体イオン濃度によって示されます。(ΔA).

あ. タンパク質 集中:

総抗酸化力 (μmol/mgプロト) = x × Vrv÷ (対×心肺蘇生法) = 34× x ÷ 心肺蘇生率

B. サンプル 重さ

総抗酸化力 (μmol/g重量) = x × Vrv÷ (Vs ÷ Vsv ×W) =34××÷W

C. 細胞 額

総抗酸化力 (μmol/104細胞) = x × Vrv÷ (Vs×Vsv÷n) = 34× x ÷ n

D. 解決 音量

総抗酸化力 (μmol/mL) =x×Vrv÷Vs=34×x

ロープ: 総反応量, 1.02 mL; 対: サンプル量, 0.03 mL;

VSv: 抽出量, 1 mL; W: サンプル重量, g;

心肺蘇生法: サンプルタンパク質濃度, mg/mL;

n: 細胞量, に基づく単位 104 (万).

注記:

1. 試薬Ⅱは人体に対して刺激性があります, 実験着とラテックスを着用してください
2. 酸性条件下ではサンプルが青く見えてはいけません, または、サンプルの結果に干渉します。
3. トゥイーンなどの洗剤, トリトン, NP-40およびDTTなどの還元剤, メルカプトエタノールは添加しないでください。
4. サンプルによって測定された吸光度の値が標準曲線の範囲を超えている場合, サンプルは適切に希釈または濃縮してから行う必要があります。
5. キットは2～8℃で保管してください。.

例:

1. シャムロック 0.1g を抽出液 1mL に加え、氷上でよくすりつぶします。, 上清を取る, 決定手順に従って操作してください, 96 ウェル平底プレートを使用して計算: ΔA=A(T)-あ(B)=0.909-0.148=0.761, 標準曲線: y=21.056x-0.0087, x=0.037を計算します, サンプルの質量に応じて総抗酸化能力を計算します (μmol/g質量) =34×x÷W=34×0.037÷0.1=12.85μmol/g質量.

参考文献：

[1] ペッレグリーニ N, セラフィニ・M, サルバトーレS, 他. スパイスの総抗酸化力, ドライフルーツ, ナッツ,

パルス, 穀物, イタリアで消費されるお菓子を 3 つの異なる in vitro アッセイで評価[J]. 分子栄養学 & 食品研究, 2006, 50(11): 1030-1038.

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