조류 성별 식별 핵산 검출 키트 (PCR 방법)

• 제품 번호： AN2206001
• 사양：48티 100티

제품소개：

깃털 등의 샘플에서 특정 핵산 단편을 증폭할 수 있는 키트입니다., 피, 그리고 다양한 새들의 조직 (포함 시타사이목, 콜럼비폼, 대장균, 조개목, Gruiformes, 그리고 일부 Anseriformes), 사용하여 PCR.

항억제제 2× Taq PCR Master Mix가 포함되어 있습니다. (염료로) PCR에 필요한 기타 구성 요소. 증폭된 산물은 결과 확인을 위해 아가로스 겔 전기영동에 직접 적용될 수 있습니다..

상품 내용：

보관 조건：

-20℃에 보관, 유통기한은 적어도 12 개월

샘플 처리:

Animal Genomic DNA Rapid Extraction Kit 참조 (PCR 분석을 위한) SanshiBio의 사용 설명서 (제품 번호: DP202) 샘플 처리를 위해. 나중에 사용하기 위해 처리된 샘플을 저장합니다..

1. 실험적 운영：

• 샘플 준비 (샘플 준비 영역)
• 핵산 추출:
• 다음의 지시 사항을 따르십시오. “동물 게놈 DNA 신속 추출 키트 (PCR 분석을 위한)” 또는 요구 사항을 충족하는 다른 적합한 핵산 추출 키트/방법을 사용하십시오.. 처리된 샘플에서 핵산 추출.
• 추출된 핵산은 최대한 빨리 검사하는 것이 가장 좋습니다.. 얼음 위에 보관하세요, 즉시 사용하지 않을 경우 4°C 또는 -20°C에서 보관하세요..

2. 반응 시스템 준비 (샘플 추가 영역)

2.1 반응 혼합물 준비:

• 샘플 수에 따라 필요한 시약의 양을 계산합니다..
• 구체적인 준비사항은 다음과 같습니다: 피펫 (n × 7.5 테스트 시약 C의 µL + n × 10 테스트 시약 D의 µL + n × 1 테스트 시약 E의 µL) 깨끗한 원심분리 튜브에. 피펫팅으로 잘 섞으세요., 그리고 분취량 18 µL을 각 웰에 넣습니다. 0.2 mL PCR 튜브 (원심 분리 관). (샘플이 많은 경우, 미리 혼합물을 준비하고 2~8°C에 잠시 보관하세요.; 이내에 사용 2 시간.)

2.2 추가하다 2 각 반응 혼합물에 추출된 샘플 핵산의 µL, 튜브에 뚜껑을 씌우다, 세부사항을 기록하다, 그리고 총 볼륨을 20 반응당 µL. 잘 섞은 뒤 원심분리한다 30 몇 초 전에 PCR 기계 증폭을 위해.

PCR 증폭 (증폭 및 제품 분석 영역)

PCR 프로토콜:

• 94°C에서 초기 변성 3 분.
• 32 주기: 94°C 30 초 (변성), 50°C 45 초 (가열 냉각), 72°C 50 초 (확대).
• 72°C에서 최종 연장 8 분, 그런 다음 4°C에서 유지합니다..
• 증폭 산물을 4°C에서 완전히 냉각하세요. (또는 -20°C에서 빠르게 약 5 분) ~을 위한 15 분.

아가로스 겔 전기영동(수평 아가로스 겔 전기영동을 예로 사용)

4.1 젤 준비:

캐스팅할 젤의 양과 젤 농도에 따라 (1%~1.5%), 전기영동 완충액의 적정량을 측정합니다. (TAE 또는 TBE, 제품 번호가 각각 DA001 또는 DA002인 경우, 또는 요구 사항을 충족하는 동등한 제품), 그리고 삼각플라스크에 부어주세요..

메모: 겔 캐스팅 완충액과 전기영동 완충액은 일관성이 있어야 합니다..

4.2 아가로스의 무게를 조심스럽게 잰다 (제품 번호: DA003, 또는 이에 상응하는 브랜드), 그리고 플라스크에 넣어주세요. 플라스크를 양피지나 밀봉 필름으로 덮고 전자레인지에 가열하여 아가로스를 녹입니다.. 끓을 때까지 가열, 내열장갑을 착용하세요, 그리고 플라스크를 부드럽게 휘젓는다. 아가로즈가 완전히 녹을 때까지 반복합니다..

메모: 아가로스 용해 과정에서는 용액이 과열되거나 끓어오르는 것을 방지하기 위해 여러 번 짧게 끓이는 과정을 사용해야 합니다.. 불분명한 전기 영동 이미지가 발생하지 않도록 아가로즈가 완전히 용해되었는지 확인하십시오..

4.3 핵산 염료 추가 (제품 번호: DA004, 또는 이에 상응하는 브랜드) 완전히 용해된 아가로스에.

4.4 아가로스 용액을 젤 캐스팅 트레이에 붓고 빗을 적절한 위치에 삽입합니다.. 젤 두께는 다음 사이여야 합니다. 3 에게 5 mm.

4.5 젤이 실온에서 굳도록 놔두세요. (~에 대한 30 분까지 1 시간). 빗을 조심스럽게 제거하고 전기영동 완충액이 미리 채워진 전기영동 탱크에 겔을 넣습니다..

전기영동 및 샘플 로딩:

4.6 짐 5 DNA 마커의 μL (제품 번호: DA005, 또는 이에 상응하는 브랜드) 그리고 10 냉각된 증폭 제품의 μL을 웰에 넣습니다.. 모든 샘플을 로딩한 후, 지지하다 2 전원을 켜기 몇 분 전. 전압을 설정하세요 (70-120V) 그리고 런타임 (20-30 분) 조건에 따라.

결과 해석

결과 결정:

• 단일 밴드가 대략적으로 나타나는 경우 700 bp, 표본이 남성인 것으로 확인됨.
• 700bp와 400bp 부근에서 두 개의 증폭된 밴드가 나타나는 경우 (또는 400bp 부근에서 증폭된 밴드가 하나만 나타납니다.), 표본이 여성인 것으로 확인됨.
• 띠가 보이지 않는 경우, 조류 성별 식별을 위한 특정 유전자는 샘플에서 검출되지 않았습니다.. 핵산 추출 및 증폭을 다시 수행하거나 제조업체의 기술 지원팀에 문의하여 도움을 받는 것이 좋습니다..

지침：

• 오염을 방지하기 위해, 실험은 엄격하게 분할되어야 한다, 인적 요인으로 인한 교차 오염을 방지하기 위해 서로 다른 구역을 물리적으로 격리합니다.. 실험 중에는 실험실 가운과 라텍스 장갑을 착용하십시오., 다양한 영역에서 별도의 도구를 사용합니다.. 구역 간 이동 시 장갑과 실험복을 갈아입어야 합니다..
• 시약은 사용하기 전에 완전히 해동되어야 합니다., 그러나 반복적인 동결-해동 주기는 피해야 합니다.. 시약 준비 및 샘플 추가에 대한 지침을 엄격히 따르십시오.. 작업대, 원심분리기, 피펫, 및 기타 기구는 염소 함유 소독제를 사용하여 정기적으로 소독해야 합니다., 에탄올, 핵산 오염 제거제, 또는 UV 램프.
• PCR 반응이 완료된 후, 즉시 뚜껑을 열지 마십시오. 에어로졸 오염을 최대한 방지하기 위해 개봉하기 전에 충분히 식을 때까지 기다리십시오..
• 이 키트는 참새목이 아닌 일부 새의 특정 유전자를 증폭하는 데에만 사용됩니다. (가금류), 다른 관련 제품의 경우, Sanli Bio에 문의하십시오.. 본 제품은 과학적 연구용으로만 사용되며 임상 진단이나 기타 목적으로는 사용할 수 없습니다..