세균 게놈 DNA 추출 키트

• 시약 키트의 구성 요소

• 저장

이 시약 키트는 실온에서 보관해야 합니다. (15-25℃) 그리고 건조한 환경에서는, 유효기간이 있는 12 개월. DNA 추출 정제 컬럼은 다음 용도로 보관할 수 있습니다. 1 시원하고 건조한 환경에서 1년 동안. 라이소자임, Proteinase K and RNase A contain preservatives, 실온에서 운송 가능, 하지만 장기간 보관을 위해서는, -20℃에 보관해야 합니다.

• 시약 키트 사용 지침

3.1 이 시약 키트는 분자생물학 연구용이므로 질병 진단이나 치료에 사용해서는 안 됩니다..

3.2 시약 키트의 일부 구성품에는 자극제가 포함되어 있습니다.. 보호복, 고글 착용 등의 보호 조치가 권장됩니다..

3.3 이 시약 키트를 사용하는 동안, 고속 원심분리기, 욕조 (금속 욕조), 소용돌이 믹서, 무수에탄올, 멸균 탈이온수, EP 튜브는 사용자가 준비해야 합니다..

• 시약 키트 소개

This kit provides a rapid and effective purification method for isolating DNA from various bodily fluids and bacterial culture fluids. It utilizes a silicon-based purification column that selectively adsorbs nucleic acids. With specific buffer solutions, bacterial DNA samples can be extracted within 30 분. 전체 정제 공정에는 페놀-클로로포름과 같은 독성 시약이 필요하지 않습니다.. The extracted DNA can be directly used for downstream experiments like PCR, 서던 블로팅, 다른 사람.

• 실험 원리 및 절차

• 추출과정

실험을 시작하기 전에:

1. Reagent Buffer B and C 저온 조건에서 침전될 수 있음. 65℃로 가열하는 것을 권장합니다. 5 분. 침전물이 용해된 후, 정상적으로 사용할 수 있어요.
2. 사용하기 전에, 규정량의 무수에탄올을 첨가한다. 세척 버퍼 1병 라벨에 표시된대로. 무수 에탄올 첨가를 나타내기 위해 라벨에 체크 표시를 하십시오..
3. 용출 완충액은0.1x TE 솔루션최소한의 EDTA 함유. EDTA가 후속 실험에 영향을 미칠 수 있는 경우, Elution Buffer를 멸균 탈이온수로 대체하는 것이 좋습니다..
4. 샘플 취급:
5. Take around 1 ml of bacterial culture, 원심분리기 12,000 rpm 1 분, aspirate the supernatant as much as possible, 추가하다 200μl of Reagent Buffer Bto the bacterial cell solution. 일반적으로, residual RNA has minimal impact on downstream experiments. If RNA interference needs to be eliminated, 추가하다 10μl of RNaseA (10mg/ml) to the mixture, incubate at 37°C for 2 minutes with vortexing during the period.
6. If the sample being processed contains Gram-positive bacteria, 추가하다 10μl of Lysozyme (10 mg/ml)그리고 200μl of Reagent Buffer B. 일반적으로, residual RNA has minimal impact on downstream experiments. If RNA interference needs to be eliminated, 추가하다 10μl of RNaseA (10mg/ml) to the mixture, incubate at 37°C for 15-30 minutes with vortexing during the period.
7. 추가하다 10단백질분해효소 K 1μl (10 mg/ml), thoroughly invert and mix, digest at 65°C for 2 분. During this period, invert and mix the sample solution 6-7 times until the sample solution becomes clear after digestion.
8. 추가하다 200μl of Reagent Buffer Cto the lysate and mix. 흰색 침전물이 나타나는 경우, it can be left to settle; 침전물이 사라지면 후속 실험에 영향을 미치지 않습니다..
9. 추가하다 200μl of ethanol, 잘 섞는다. Some precipitation might occur but won’t affect subsequent experiments.
10. Transfer the obtained liquid into a DNA extraction purification column, leave at room temperature for 2 분, 원심분리기 12,000 rpm 30 초. 수집된 폐기물을 폐기하고 다음 단계를 위해 수집 튜브를 정제 컬럼에 다시 삽입합니다..
11. 추가하다 600세척 완충액의 μl 1, 원심분리기 12,000 rpm 30 초, 폐기물을 버리다, and reinsert the DNA extraction purification column into the holder.

(메모: Ensure ethanol has been added to Wash Buffer 1.)

7. 추가하다 500세척 완충액의 μl 1 DNA 추출 정제 컬럼으로, 원심분리기 12,000 rpm 2 분, extending the centrifugation time as needed for a drier membrane.
8. DNA 추출 정제 컬럼을 배치합니다. (holder) 새로운 원심분리 튜브에, 열려 있는, 65°C에서 가열합니다. 2 분. Extend this step as necessary to evaporate ethanol, preventing ethanol residues from affecting downstream experiments.
9. 추가하다 50-100용출 완충액 μlonto the column membrane, 원심분리기 12,000 rpm 2 분.

(메모: 1. DNA 용출 50 μl of Elution Buffer can increase DNA concentration but reduce the total DNA yield. 2. The eluted DNA from the eluate can be reapplied to the DNA extraction purification column, 다시 원심분리기를 놓는다 12,000 rpm 2 minutes to enhance DNA yield.)