박테리아 총 RNA (...을 더한) 추출 키트

1. 시약 키트의 구성 요소

2. 저장

이 시약 키트는 실온에서 보관해야 합니다. (15-25℃) in a dry environment and can be preserved for 12 개월. Lysozyme contains a preservative, 실온에서 운송 가능; 하지만, for long-term storage, it should be stored at -20℃

3. 시약 키트 사용 지침

3.1 이 키트는 분자 생물학 연구 목적으로 제작되었으며 질병 진단이나 치료에 사용해서는 안 됩니다..

3.2 키트의 일부 구성품에는 자극제가 포함되어 있습니다.; 필요한 예방 조치를 취하는 것이 좋습니다 (보호복과 고글을 착용하는 등).

3.3 이 키트를 사용하려면 고속 원심분리기 등 추가 장비가 필요합니다., 욕조 (금속 욕조), 소용돌이 믹서, 무수에탄올, 액체 질소, 클로로포름, 멸균 탈이온수, 및 EP 튜브.

4. 시약 키트 소개

This RNA purification kit provides a rapid and efficient purification solution for bacterial RNA, suitable for most bacterial tissues. The kit employs DNA removal technology to effectively eliminate genomic DNA, and the resulting RNA samples typically do not require on-column digestion, reducing the risk of RNA degradation.

The RNA Fast Purification Kit allows for the extraction of total bacterial RNA (핵 RNA 및 세포질 RNA 포함) 이내에 1 시간. 추출된 RNA를 RT에 바로 활용 가능-PCR, 노던 블로팅, 등. The entire purification process does not involve toxic reagents such as phenol-chloroform, making the RNA purification kit well-suited for various sample types.

5. 실험 원리 및 절차

6. 추출과정

실험 시작 전 주의사항:

ㅏ. 사용하기 전에, 지정된 양의 무수 에탄올을 첨가하십시오. 세척 버퍼 1 시약병 라벨에 표시된 대로, and mark with a check to indicate the addition of absolute ethanol.

비. 용출 완충액은 0.1x TE 솔루션 최소한의 EDTA 함유. If EDTA may impact subsequent experiments, Elution Buffer를 멸균 탈이온수로 교체하는 것이 좋습니다..

1. 샘플 처리:

ㅏ. Gram-positive bacteria: Centrifuge the bacterial suspension at 4℃, 12,000 rpm 2 분, collect bacterial cells (1.53 밀리리터), 상층액을 버린다, 추가하다 100μl 리소자임 (10mg/ml), thoroughly mix the bacterial cells, 그리고 실온에서 배양하세요 15-30 분.

비. 그람 음성 박테리아: Centrifuge the bacterial suspension at 4℃, 12,000 rpm 2 분, collect bacterial cells (1.53 밀리리터), 상층액을 버린다, 추가하다 10μl 리소자임 (10mg/ml), thoroughly mix the bacterial cells, 그리고 실온에서 배양하세요 3-5 분.

2.추가하다 400μl RNA Extraction Buffer I, vortex to mix thoroughly.

3. Transfer the lysate to a DNA clearance purification column, 원심분리기 13,000 rpm 2 분, collect the filtrate (RNA is present in the filtrate).

4. Accurately estimate the volume of the filtrate, 추가하다 0.5 times the volume of absolute ethanol, 잘 섞는다; if precipitation occurs, it does not affect subsequent experiments.

5. Add the obtained liquid to the RNA extraction purification column (매번 약 650~700μl), 이상의 원심분리기 8,000 rpm 1 분, 수집된 폐액을 폐기합니다., and reinsert the collection tube into the RNA extraction purification column for the next step.

6. 단계 반복 5, add the remaining liquid to the RNA extraction purification column, 이상의 원심분리기 8,000 rpm 1 분, discard the waste liquid and the collection tube.

7. Place the RNA extraction purification column into a new collection tube, 추가하다 600μl 억제제 제거 완충액, 이상의 원심분리기 8,000 rpm 1 분, 폐액을 버리다, and reinsert the RNA extraction purification column into the tube for the next step.

8. 추가하다 700μl 세척 완충액 1 to the RNA extraction purification column, 원심분리기 14,000 rpm (20,000×g) ~을 위한 2 분, extend the centrifugation time appropriately to ensure the membrane is thoroughly dried.

(메모: Confirm that absolute ethanol has been added to Wash Buffer 1. 에탄올의 존재는 후속 실험에 심각한 영향을 미칩니다., 그래서 멤브레인 건조가 중요합니다. 원심분리 후, ensure there is no ethanol present before elution. Discard the waste liquid and the collection tube.

After washing with Wash Buffer 1, the membrane on the RNA extraction purification column should only have a slight color. 원심분리 후, carefully remove the RNA extraction purification column without touching the collection tube to ensure no ethanol interference.)

9. Place the RNA extraction purification column into a new centrifuge tube, 똑똑 떨어지는 물방울 소리 100 μl Elution Buffer onto the membrane, 실온에서 배양하다 5 분 (15°C~25°C), 이상의 원심분리기 8,000 rpm 1 분.

(메모: RNA 용출 50 μl Elution Buffer can increase RNA concentration but decrease total RNA yield.)

10. 이전 단계를 반복하세요..

(메모: A new centrifuge tube can be used to collect the RNA eluted the second time, or the original collection tube can be used to continue collecting RNA.)