CTAB 방식 소규모 식물 게놈 DNA 추출 키트

1. 시약 키트의 구성 요소

2. 저장

이 키트는 실온에 보관해야 합니다. (15-25℃) 건조한 상태에서 보관할 수 있습니다. 12 개월. DNA 추출 정제 컬럼은 서늘하고 건조한 환경에 최대 1년 동안 보관할 수 있습니다. 1 년도. RNase A에는 방부제가 포함되어 있어 실온에서 운송 가능, 하지만 장기간 보관을 위해서는, -20℃에 보관해야 합니다.

3. 시약 키트 사용 지침

3.1 이 키트는 분자 생물학 연구 목적으로 제작되었으며 질병 진단이나 치료에 사용해서는 안 됩니다..

3.2 키트의 일부 구성품에는 자극제가 포함되어 있습니다.; 필요한 예방 조치를 취하는 것이 좋습니다 (보호복과 고글을 착용하는 등).

3.3 이 키트를 사용하려면 고속 원심분리기 등 추가 장비가 필요합니다., 욕조 (금속 욕조), 소용돌이 믹서, 무수에탄올, 액체 질소, 클로로포름, 멸균 탈이온수, 및 EP 튜브.

4. 시약 키트 소개

그만큼 CTAB-기반 플랜트 DNA 정제 DNA 정제를 위한 향상된 CTAB 방법을 제공하는 키트, DNA를 효율적으로 침전시키는 특정 결합 완충액 활용, 이후 흡착 컬럼을 통해 고순도의 DNA를 수집합니다..

이 키트는 식물 조직 및 곰팡이에 널리 사용됩니다., 내의 샘플에서 전체 DNA를 추출할 수 있습니다. 2 시간 (미토콘드리아 DNA, 엽록체 DNA 포함). 추출된 DNA는 다음과 같은 후속 실험에 직접 사용될 수 있습니다. PCR, 서던 블로팅, 다른 사람.

5. 실험 원리 및 절차

6. 추출과정

실험 시작 전 주의사항:

1. 시약 완충액 A 및 C 저온 조건에서 침전될 수 있음. 65°C에서 가열하는 것이 좋습니다. 5 몇 분 후 침전물이 용해된 후 사용하세요..
2. 씻다완충기 1 병 라벨에 표시된 대로 지정된 양의 무수 에탄올을 첨가해야 합니다.. 에탄올을 첨가한 후 라벨을 표시하십시오..
3. 용출 버퍼는 0.1x TE 솔루션최소한의 EDTA 함유. EDTA가 후속 실험에 영향을 미치는 경우, 용출 완충액 대신 멸균 탈이온수를 권장합니다..

1. 샘플 취급:
2. 재료 수집 및 보관:

갓 수집한 자료, 즉시 사용하지 않으면, 액체질소에 넣고 최종적으로 -80°C에 보관해야 합니다.. 건조된 재료는 실온에서 보관 가능.

1. 가능하다면, 다당류와 폴리페놀 함량이 적기 때문에 신선한 재료를 수집하세요..
2. 액체배양에서 곰팡이를 채취할 때, 원심분리로 액체를 분리하고 곰팡이 시체를 수집합니다..
3. 주위를 갈기 100 mg 이하의 신선한 샘플 20 액체 질소를 사용한 건조 물질의 mg.

(메모: 샘플 수량에 따라 사용 전 사전 실험을 통해 최적화가 필요할 수 있습니다..)

3. 추가하다 550 시약 완충액 A 1μl 및 10 RNase A의 μl (10 mg/ml) 지상 샘플에 조직 덩어리가 없는지 확인하기 위해. 조직 덩어리는 용해하기 어렵고 DNA 수율을 감소시킬 수 있습니다.. 섞지 마세요 시약 완충액 A 및 RNase A사용하기 전에.
4. 65°C에서 배양하세요. 20-30 분, 부드럽게 반전 2-3 타임스. 이 단계는 세포 용해를 위한 단계입니다..
5. 용해물을 원심분리합니다. 5 분 14,000 rpm (20,000×g).

(메모: 일부 식물 재료에는 이 단계에서 끈적끈적한 물질이 많이 포함될 수 있습니다., 후속 단계에서 DNA를 절단할 수 있음. 이상적으로는, 원심분리 후 상청액을 새 원심분리 튜브로 옮겨 이들 물질을 제거합니다..)

6. 이전 단계에서 얻은 액체를 조심스럽게 새 원심분리 튜브로 옮깁니다..

(메모: 약 500 μl의 액체를 전송할 수 있습니다.; 일부 종의 경우, 그것은보다 작을 수 있습니다 500 μl.)

7. 용해물에 동일한 양의 클로로포름을 추가하고 부드럽게 뒤집어 혼합합니다..

(메모: 예를 들어, 추가하다 500 클로로포름 1μl(있는 경우) 500 용해물의 μl. 용해물의 양이 다음보다 적은 경우 500 μl, 이에 따라 클로로포름의 양을 조정.)

8. 원심분리기 12,000 rpm 10 분.
9. 상등액을 조심스럽게 새 원심분리 튜브로 옮깁니다. (약 500 μl).
10. 같은 양의 것을 추가하십시오. 시약 완충액 C 그리고 용해물에 동량의 무수 에탄올을 첨가합니다., 그리고 섞는다.

(예를 들어, 당신이 추가한다면 450 시약 완충액 C의 μl, 그런 다음 추가 450 무수 에탄올 μl. 용해물의 양이 다음보다 적은 경우 450 μl, 시약 완충액 C의 양을 비례적으로 줄입니다.. 시약 완충액 C를 추가하면 약간의 침전이 발생합니다., 하지만 후속 실험에는 영향을 미치지 않습니다..)

11. 얻은 액체를 DNA 정제 컬럼으로 옮깁니다. (전부), 약 650-700 매번 μl. 원심분리기 이상 8,000 rpm 1 분, 수거된 폐기물을 폐기하다, 다음 단계를 위해 수집 튜브를 정제 컬럼에 다시 삽입합니다..
12. 단계 반복 11, 남은 액체를 DNA 정제 컬럼에 추가 (전부) 그리고 원심분리기를 켠다 8,000 rpm 1 분. 폐기물과 수집 튜브를 폐기하십시오..
13. DNA 정제 컬럼 배치 (전부) 새로운 수집 튜브에, 추가하다 300 μl의 씻다 완충기 1, 원심분리기 이상 8,000 rpm 1 분, 폐기물을 버리다, DNA 정제 컬럼을 다시 삽입합니다. (전부) 다음 단계를 위해 튜브에.

(메모: 무수에탄올을 첨가했는지 확인하세요. 씻다 완충기 1.)

14. 추가하다 500 헹굼 완충액 μl 1 DNA 정제 컬럼으로 (전부), 원심분리기 14,000 rpm (20,000×g) ~을 위한 2 분, 더 건조한 멤브레인의 경우 원심분리 시간을 약간 연장합니다..
15. DNA 정제 컬럼 배치 (전부) 새로운 원심분리 튜브에, 열려 있는, 65°C에서 가열합니다. 2 분. 잔류 에탄올이 다운스트림 실험에 영향을 미치는 것을 방지하기 위해 이 단계를 연장하여 에탄올을 최대한 증발시킬 수 있습니다..
16. 똑똑 떨어지는 물방울 소리 100 용출 버퍼의 μl멤브레인 위에, 원심분리기 12,000 rpm 2 분.

(메모: 1. DNA 용출 50 μl 용출 완충액은 DNA 농도를 증가시키지만 총 DNA 수율을 감소시킬 수 있습니다.. 2. 두 번째 용출을 위해 용출액을 DNA 정제 컬럼에 다시 적용할 수 있습니다., 원심분리기 12,000 rpm 2 수집하는 데 몇 분, 이는 DNA 수율을 향상시킬 수 있습니다.)