제품개요
NR (EC 1.7.1.3) 식물에서 널리 발견되는 효소이다.. 질산성 질소를 암모니아성 질소로 전환시키는 데 중요한 역할을 하며 유도성 효소이기도 합니다., 작물 수확량과 품질에 영향을 미침. NR은 질산염을 아질산염으로 환원하는 것을 촉매합니다.: NO3- + NADH+H+ → NO2- + NAD+ + H2O. 산성 조건에서, 생성된 NO2- 디아조화 반응에 참여하여 자홍색 화합물을 형성할 수 있습니다.. 이 화합물은 다음과 같은 흡수 피크를 갖습니다. 540 nm, 그리고 흡광도의 변화는 540 nm는 효소 활성을 나타내는 데 사용될 수 있습니다..
키트 구성품
- 유도제 스톡 솔루션: 50 밀리리터 x 1 병
- 추출 용액: 30 밀리리터 x 1 병
- 시약 1: 12 밀리리터 x 1 병
- 시약 2: 파우더× 2 약병
- 시약 3: 15 밀리리터 x 1 병
- 시약 4: 15 밀리리터 x 1 병
- 기준: 1 밀리리터 x 1 약병
솔루션 준비
- 유도 솔루션: 사용 전 유도원액을 증류수로 10배 희석. 가져가다 10 mL의 유도제 스톡 솔루션을 추가하고 90 증류수 1mL. 잘 섞어주세요. 매번 사용하기 전에 신선하게 준비하십시오..
- 시약 2: 추가하다 1 증류수 1mL. -20°C에서 분취하여 보관. 다음을 위해 저장할 수 있습니다. 2 -20°C에서 몇 주. 사용하기 전에, Reagent Two를 증류수로 50배 희석. 가져가다 10 시약 2 μL 및 추가 490 증류수 μL. 잘 섞다.
- 기준: 준비하다 0.1 μmol/mL 아질산나트륨 표준용액을 희석하여 10 μmol/mL 아질산나트륨 표준용액 100배 증류수로 희석하여 사용.
노트
- 흡광도가 더 큰 경우 0.8, 추출 용액으로 샘플을 희석. 계산식에 따라 희석배수를 조정하는 데 주의하세요..
- 실험을 위한 시료 분석표에 나열된 시약 첨가 순서를 엄격히 따르십시오..
실험 절차
나. 샘플 처리
조직 전처리:
- 비커에 적당량의 유도제 용액을 첨가합니다.. 신선한 샘플 세척, 여과지로 말려주세요, 유도제 용액에 넣습니다. (잠길 정도로). 어둠 속에서 배양 2 시간. 샘플 제거, 여과지로 말려주세요, 그리고 영하 20°C에서 얼려주세요 30 분. 샘플을 해동하고 다시 여과지로 건조시킵니다.. (필요에 따라 유도치료를 실시합니다.. 일반적으로, 유도치료가 필요하지 않습니다.. 사전 실험 결과에 활동이 없는 경우, 유도치료가 필요합니다.)
- 대략 무게를 잰다 0.1 g 샘플 및 추가 1 조직 무게 비율에 따른 추출 용액의 mL (g) 추출 용액 부피에 (밀리리터) ~의 1:5 에게 10. 얼음 욕조에서 갈아서, 원심분리기 8000 g, 4°C 10 분, 그리고 상층액을 모아서. 테스트를 위해 상층액을 얼음 위에 보관하십시오..
세포 또는 박테리아 전처리:
- 원심분리 튜브에 세포 또는 박테리아 샘플을 수집하고 상층액을 버립니다.. 추가하다 1 mL당 추출 용액 5 백만 개의 세포 또는 박테리아. 박테리아 또는 세포를 초음파 처리 (힘 200 여, 초음파 처리 3 초, 간격 10 초, 반복하다 30 타임스). 원심분리기 8000 g, 4°C 10 분, 상등액을 수집하고 테스트를 위해 얼음 위에 보관하십시오..
II. 분석 단계
- 최소한 가시 분광 광도계를 예열하십시오. 30 분, 파장을 조정하여 540 nm, 증류수로 제로화.
- 샘플 분석:
| 시약 이름 | 시험관 | 컨트롤 튜브 | 표준 튜브 | 빈 튜브 |
|---|---|---|---|---|
| 견본 | 100 μL | – | – | – |
| 0.1 μmol/mL 표준 용액 | – | – | 100 μL | – |
| 증류수 | – | 375 μL | – | 475 μL |
| 시약 1 | 375 μL | – | 375 μL | – |
| 시약 2 | 125 μL | 125 μL | 125 μL | 125 μL |
| 시약 3 | 250 μL | 250 μL | 250 |
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