앵무새 부리 및 깃털 질병 바이러스 (PBFDV) 핵산 테스트 키트

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제품소개：

이 테스트 키트는 시타신 부리 및 깃털 질병 바이러스의 보존된 유전자를 증폭하고 검출하도록 설계되었습니다. (PBFDV) 새 깃털과 같은 샘플에서, 피, 조직, 구강 면봉, 그리고 배설강 면봉. 내생적 내부 참조 도입, 핵산 추출 및 증폭 과정을 모니터링할 수 있습니다., 탐지 결과의 정확성 보장.

상품 내용：

보관 조건：

-20℃에 보관, 유통기한은 적어도 12 개월

실험적 운영：

1. 샘플 준비 (시료 준비 영역)

1.1 샘플 요구사항：

깃털: 최소한으로 수집하십시오. 5 가슴에서 나온 깃털, 복부, 아니면 다리 (깃털 샤프트 부분을 포함하여), 자연적으로 떨어진 깃털을 사용하지 마세요..

피: EDTA를 항응고제로 사용, 헤파린을 항응고제로 사용하지 마십시오. 신선한 전혈을 사용해야 합니다., 또는 최대 2~8℃에서 보관 가능합니다. 7 날, 또는 최대 -20℃에서 보관 3 개월. 가능한 한 반복적인 냉동과 해동을 피하세요.

조직: 신선한 근육이나 장기 조직을 채취합니다. (피부에 샘플을 사용하지 마십시오, 힘줄, 또는 처리하기 어려운 근막) 100mg 이하. 200-500μL의 멸균수를 사용하여 조직 균질액을 준비합니다., 그런 다음 후속 샘플 준비를 진행합니다..

1.2 샘플 준비：

쓰리라이온스바이오텍 매뉴얼을 참고해주세요. “동물 게놈 DNA 신속 추출 키트 (~을 위한 PCR 분석)” (부품 번호: DP202), 또는 관련 요구 사항을 충족하는 기타 핵산 추출 키트/방법, 처리된 샘플 추출용. 추출된 검체핵산을 아이스박스에 넣어 신속하게 검사를 진행해 보세요.. 최대 4°C에서 보관할 수 있습니다. 7 일 또는 -20°C에서 최대 6 개월.

2 . 반응 시스템의 준비 (샘플 추가를 위한 반응 영역).

2.1 n+2 반응 튜브 제거 (n은 테스트 샘플 수를 나타냅니다.) PBFDV 양성 대조군 함유, 음성 대조군, 및 필요한 PBFDV 반응 용액. 시약을 실온에서 완전히 녹입니다., 원심분리기 10 초, 그런 다음 튜브 벽과 캡 내부의 액체를 바닥까지 원심 분리합니다.. 나중에 사용할 수 있도록 튜브를 아이스박스에 보관하세요..

2.2 2μL의 음성 대조군 추가, 추출된 샘플 핵산, 및 PBFDV 양성 대조군을 순차적으로 반응 용액에 첨가. 튜브 캡을 단단히 닫으십시오., 필요한 기록을 작성하다, 각 반응의 총 부피가 25μL인지 확인하십시오.. 내용물을 잘 섞은 후 원심분리합니다. 10 증폭 실험을 수행하기 몇 초 전에 PCR 기계.

3. PCR 증폭 (증폭 및 제품 분석 영역).

PCR 증폭과정은 다음과 같다: 95℃에서 사전 변성 3 분; 95℃에서 변성 10 초, 60℃에서 어닐링 및 신장 40 초, 총에 대해 35 사이클. 60℃에서 형광신호를 수집. 형광 검출에서는, 첫 번째 채널로 FAM을 선택하세요 (APV 특이적 유전자의 경우), 두 번째 채널에 대해 VIC/HEX를 선택합니다. (내인성 참조 유전자의 경우). ABI 시리즈 실시간 형광 정량 PCR 장비를 사용하는 경우, 사전에 제조업체에 문의하거나 필요한 경우 직접 ROX 교정 염료를 추가할 수 있습니다.; 그렇지 않으면, 정상적인 절차를 따르세요.

4. 결과판정

4.1 FAM 채널과 VIC/HEX 채널 모두에서 양성 대조군의 Ct 값이 <30 그리고 보여주다 “에스”-모양의 증폭 곡선, 음성 대조군은 Ct 값이 없거나 Ct 값 ≥35이고 “에스”-모양의 증폭 곡선, 실험 결과는 유효하다. 그렇지 않으면, 실험은 반복되어야 한다, 그리고 반복 실험이 여전히 유효하지 않은 경우, 기술 담당자에게 문의해 주세요.

4.2 VIC/HEX 채널에 있는 샘플의 Ct 값은 ≤32여야 하며 다음을 표시해야 합니다. “에스”-모양의 증폭 곡선, 시료 추출 및 증폭이 효과적임을 나타냅니다.. Ct 값이 없거나 Ct 값이 32 < 코네티컷 ≤ 35 VIC/HEX 채널에서, 이는 샘플 핵산 추출이 표준에 미치지 못하거나 강한 억제 간섭이 있음을 나타냅니다. (알코올이나 소독제 잔류물 등, 항응고제, 등.) 증폭을 방해하는 것. 핵산 추출 및 증폭을 위해 시료를 재처리하는 것이 좋습니다..

4.3 VIC/HEX 채널 감지가 유효한 후, FAM 채널에서의 결정은 다음과 같이 수행됩니다.:

• Ct 값 ≤ 32 그리고 “에스”-모양의 증폭 곡선이 관찰됩니다, APV 양성으로 판정됨, 샘플에 APV 바이러스가 존재함을 나타냅니다..
• Ct 값은 32 < 코네티컷 < 35, 의심스러운 것으로 간주됩니다, 샘플을 다시 테스트해야 합니다. (핵산을 다시 추출하고 테스트하여, 먼저 제외하는 것이 좋습니다. “위양성” 환경 에어로졸 오염으로 인한 결과). 에어로졸 오염을 제외하고 FAM 채널에서 재검사한 결과 Ct 값이 나타나는 경우 < 35 명확한 증폭 곡선, APV 양성으로 판정됨; 그렇지 않으면, 부정적으로 판단됩니다.
• Ct 값 없음 또는 Ct 값 ≥ 35 그리고 아니 “에스”-모양의 증폭 곡선, APV에 대해서는 음성으로 판정됩니다., APV 바이러스가 샘플에서 검출되지 않았음을 나타냅니다..

지침：

1)오염을 방지하기 위해, 실험은 분할된 작업으로 엄격하게 수행되어야 합니다.. 인적 요인으로 인한 교차 오염을 방지하기 위해 파티션 간을 물리적으로 격리하는 것이 바람직합니다.. 실험 중에는 실험실 가운과 라텍스 장갑을 착용하십시오., 다양한 영역에서 별도의 도구를 사용합니다.. 필요에 따라 장갑과 실험복을 갈아입습니다.. PCR 후, 즉시 뚜껑을 열지 마십시오. 에어로졸 오염을 최소화하기 위해 샘플링을 시작하기 전에 충분히 냉각될 때까지 기다리십시오..

2)사용하기 전에 시약을 완전히 해동하십시오, 그러나 반복적인 냉동과 해동을 피하십시오. 시약 준비에 대한 지침을 엄격히 따르십시오., 샘플 추가, 그리고 다른 단계. 작업대, 원심분리기, 피펫, 및 기타 기구는 염소 함유 소독제를 사용하여 정기적으로 소독해야 합니다., 에탄올, 핵산 오염 제거제, 아니면 자외선 램프.

3)음성 결과가 반드시 남성을 의미하는 것은 아닙니다.. 알려지지 않은 돌연변이, 샘플 품질이 좋지 않음, 낮은 농도, 또는 핵산 추출에 강력한 억제 물질이 존재하는 경우 (테스트) 또한 다음으로 이어질 수 있습니다. “부정적인” 결과. 이 키트는 앵무새의 CHD-W 유전자의 특정 증폭에만 사용됩니다.. 다른 제품의 경우, 제조사에 문의해주세요.

4)본 제품은 일회용입니다. 얼었다 녹았다를 반복하지 마세요. 이는 과학적 연구 목적으로만 사용되며 임상 진단이나 기타 목적으로 사용되어서는 안 됩니다..