살모넬라 핵산 검출 키트

제품 번호：AP2308004 사양：24티/48티 저장：-20℃

제품소개：

살모넬라는 살모넬라증을 유발할 수 있는 일반적인 식품매개 병원성 박테리아입니다., 계란과 함께, 가금류, 고기는 전염의 일반적인 원인입니다. 이 테스트 키트는 실시간 형광 정량을 활용합니다. PCR 물 등 시료에서 살모넬라균의 특정 DNA 단편을 선택적으로 증폭시키는 기술, 대변, 그리고 오염된 것으로 의심되는 음식. 샘플 내 살모넬라균의 존재 여부는 Ct 값으로 확인할 수 있습니다., 또는 검체 내 살모넬라 오염 수준을 표준 곡선을 통해 확인할 수 있습니다..

상품 내용：

보관 조건：

-20℃에 보관, 유통기한은 적어도 12 개월.

실험적 운영：

1. 샘플 준비 (샘플 준비 영역)

1.1 샘플 요구 사항:

– 구강 및 배설강 면봉: 멸균된 면봉을 가져가세요, 새의 목이나 배설강에 삽입합니다., 세 번 회전, 원심분리용 튜브에 넣는다, 노출된 부분을 잘라내고, 뚜껑을 꼭 닫아라, 그리고 라벨을 붙인다. 즉시 테스트할 수 있는 샘플은 2~8°C에서 보관해야 합니다. 24 시간, 즉시 테스트할 수 없는 샘플은 -20°C에 보관해야 합니다..

– 전혈: EDTA를 항응고제로 사용, 헤파린 항응고제 피하기, 신선한 전혈을 사용, 또는 2~8°C에서 1시간 이상 보관하지 마세요. 7 날, 또는 -20°C에서 1시간 이상 보관하지 마세요. 3 개월, 반복되는 동결-해동 주기 방지.

– 조직: 100mg을 초과하지 않는 신선한 근육이나 장기 조직을 섭취하세요., 200-500μL 멸균수를 사용하여 조직 균질액을 준비합니다., 후속 시료 준비를 진행합니다..

1.2 샘플 준비:

에 따르면 “GB 4789.4-2016 국가식품안전표준 – 식품미생물검사 – 살모넬라 검사” 부분 5.1 또는 기타 적용 가능한 표준, 사전 농축을 통해 샘플을 처리합니다., 나중에 사용하기 위해 박테리아 현탁액을 준비합니다.. 무게 25g (밀리리터) 샘플을 225mL의 Buffered Peptone Water가 들어 있는 멸균 균질화 컵에 넣습니다. (BPW). 8000rpm/min~10000rpm/min에서 1~2분 동안 균질화하거나 225mL의 BPW가 들어 있는 멸균 균질화 백에 넣고 스토처로 1~2분 동안 균질화합니다.. 시료가 액체인 경우, 균질화는 필요하지 않습니다; 잘 흔들어. pH 측정이 필요한 경우, 1mol/mL 멸균 NaOH 또는 HCl을 사용하여 pH를 6.8±0.2로 조정합니다. 무균 작업을 수행하여 샘플을 500mL 원뿔형 플라스크로 옮깁니다.. 균질화 백을 사용하는 경우, 직접 재배가 가능합니다. 36°C±1°C에서 8~18시간 동안 배양합니다.. 샘플이 냉동제품인 경우, 45°C 미만의 온도에서 15분 이내, 또는 2°C~5°C에서 18시간 이내로 해동하십시오. Sanshi Biological을 참조하십시오. “총 DNA/RNA 추출 키트 수동” (목록: DP201) 또는 처리된 샘플에서 핵산 추출에 대한 관련 요구 사항을 충족하는 기타 핵산 추출 키트/방법. 추출된 핵산 샘플을 아이스박스에 넣고 최대한 빨리 검출을 수행합니다.. 4°C에서 1시간 이상 보관하지 마십시오. 7 일 또는 -20°C 이하에서 6 개월.

2. 반응 시스템 준비 (반응 영역)

2.1 키트의 각 구성품을 꺼내세요., 실온에서 완전히 해동, 원심분리기 10 초, 튜브 벽과 튜브 캡 내부의 액체를 튜브 바닥까지 원심분리합니다.. 시료량에 따라 반응액을 준비합니다. (n+2, 여기서 n은 샘플 수입니다., 설정하는 것이 좋습니다 1 양성 대조군과 1 각 실험에 대한 음성 대조군). 구체적인 준비 방법: 가져가다 (n+2) Sal 프리믹스 용액이 포함된 반응 튜브, 각 튜브에 PiHV 반응 용액 11.5μL를 추가합니다., 피펫을 사용하여 완전히 섞으세요., 23웰당 µL, 그리고 쿨러에 보관하세요.

2.2 그런 다음 2μL의 음성 대조군을 순차적으로 추가합니다., 추출된 샘플 핵산, 반응 용액에 대한 Sal 양성 대조군. 튜브 캡을 닫으세요., 기록을 세우다, 각 반응의 총 부피는 25μL입니다.. 잘 섞어주세요, 원심분리기 10 초, PCR 기기에서 증폭 실험을 수행합니다..

3. PCR 증폭 (증폭 및 제품 분석 영역)

95°C에서 사전 변성 2 분; 95°C에서 변성 10 초, 60°C에서 어닐링 및 신장 35 초, 40 사이클. 60°C에서 형광 신호 수집. FAM 형광 채널 선택 (ABI 시리즈와 같은 실시간 형광 정량 PCR 장비를 사용합니다., 필요하다면, 제조업체에 문의하거나 ROX 수정 염료를 추가하세요.; 그렇지 않으면, 정상적인 절차를 따르다).

4. 결과 해석

4.1 실험 타당성 조건:

양성 대조군: FAM 채널의 Ct 값 < 28 그리고 의 등장 “에스”-모양의 증폭 곡선. 음성 대조군: Ct 값 없음 또는 Ct 값 ≥ 40 그리고 아니 “에스”-모양의 증폭 곡선. 실험 결과는 이러한 조건에서 유효합니다.; 그렇지 않으면, 실험을 반복하다. 반복 테스트가 여전히 유효하지 않은 경우, 제조업체의 기술 담당자에게 문의하십시오..

4.2 샘플 결과의 해석:

Ct 값 ≤ 35 와 “에스”-모양의 증폭 곡선은 살모넬라 핵산에 대해 양성으로 간주됩니다.. 사이의 Ct 값 35 그리고 40 의심스러운 것으로 간주됩니다, 다시 테스트하는 것이 좋습니다. 이는 표준 이하의 핵산 추출이나 강력한 억제 물질의 존재 때문일 수 있습니다. (잔류소독제 등, 항응고제, 등.). 핵산 추출 및 증폭을 위해 샘플을 재처리하는 것이 좋습니다.. 첫 번째, 들어오지 못하게 하다 “위양성” 에어로졸 오염으로 인한 결과, 그런 다음 핵산을 다시 추출하고 테스트합니다.. 만약에, 에어로졸 오염을 제외한 후, FAM 채널 재테스트에 Ct 값이 표시됩니다. < 35 명확한 증폭 곡선, 긍정적으로 여겨진다; 그렇지 않으면, 부정적인 것으로 간주됩니다.

Ct 값 없음 또는 Ct 값 ≥ 40 그리고 아니 “에스”-모양의 증폭 곡선은 살모넬라 핵산에 대해 음성으로 간주됩니다..

지침：

• 오염을 방지하기 위해, 실험은 엄격하게 분할되어야 한다, 인적 요인으로 인한 교차 오염을 피하기 위해 파티션 간의 물리적 격리가 선호됩니다.. 실험 중에는 실험실 가운과 라텍스 장갑을 착용하십시오., 다양한 영역에서 도구를 독립적으로 사용, 필요할 때 장갑과 실험복을 갈아 입으세요.. PCR 후, 즉시 뚜껑을 열지 마십시오; 에어로졸 오염을 최소화하기 위해 충분히 식힌 후 개봉하십시오..
• 사용하기 전에 시약을 완전히 해동하십시오., 그러나 반복적인 동결-해동 주기는 피하십시오.. 키트에 제공되는 PCR 반응 튜브는 0.2mL입니다.; 교체가 필요한 경우, 완전 해동 후 이송. 시약 준비 및 샘플 추가에 대한 지침을 엄격히 따르십시오.. 워크스테이션, 원심분리기, 피펫, 기타 기구는 염소 함유 소독제로 정기적으로 소독해야 합니다., 술, 핵산 오염 제거제, 아니면 자외선.
• 부정적인 결과가 반드시 호스트가 바이러스에 감염되지 않았다는 것을 의미하지는 않습니다.. 샘플 품질이 좋지 않음, 낮은 바이러스 부하, 또는 강력한 억제 물질의 존재 (알코올과 같은, 소독제, 항응고제, 등.) 핵산 추출에 실패할 수 있습니다. (발각) 그리고 “부정적인” 결과. 결과 해석 기준을 따르십시오., 그리고 의심스러운 결과가 있을 때, 먼저 에어로졸 오염을 제외합니다.. 다른 질문이 있는 경우, 제조업체의 기술 담당자에게 문의하세요..
• 본 제품은 일회용입니다. 시약의 구성 요소는 자연광에 민감합니다.; 포장 및 보관 중 빛 노출을 피하십시오.. 포장 후, 반복적으로 동결-해동하지 마십시오. 과학 연구용으로만 사용; 임상 진단이나 기타 목적이 아닌 경우.