Small Amount Tissue microRNA Extraction kit

1. 시약 키트의 구성 요소

2. 저장

이 시약 키트는 실온에서 보관해야 합니다. (15-25℃) in a dry condition and is stable for 12 개월.

3. 시약 키트 사용 지침

3.1 이 키트는 분자 생물학 연구 목적으로 제작되었으며 질병 진단이나 치료에 사용해서는 안 됩니다..

3.2 키트의 일부 구성품에는 자극제가 포함되어 있습니다.; 필요한 예방 조치를 취하는 것이 좋습니다 (보호복과 고글을 착용하는 등).

3.3 이 키트를 사용하려면 고속 원심분리기 등 추가 장비가 필요합니다., 욕조 (금속 욕조), 소용돌이 믹서, 무수에탄올, 액체 질소, 클로로포름, 멸균 탈이온수, 및 EP 튜브.

4. 시약 키트 소개

This microRNA purification kit provides a fast and efficient method for purifying microRNA from various tissues, suitable for most species. Tissues exceeding 100 mg can be processed using this RNA purification kit. The kit employs special DNA cleanup column technology to remove genomic DNA and large RNA fragments during the experimental process. In general, additional digestion on DNA columns is not required, preventing microRNA degradation.

The RNA rapid purification kit can extract plant microRNA within 1 시간. The extracted microRNA can be directly used for RT-PCR, 노던 블로팅, 등. 전체 정제 공정에는 페놀-클로로포름과 같은 독성 시약이 필요하지 않습니다., making the microRNA purification kit suitable for various other samples.

5. 실험 원리 및 절차

6. 추출과정

실험 시작 전 주의사항:

ㅏ. 사용하기 전에, 규정량의 무수에탄올을 첨가한다. 씻다 완충기 1 시약병의 라벨에 따라, 무수 에탄올 첨가를 나타내기 위해 라벨에 체크 표시를 하십시오..

비. 용출 완충액은 0.1x TE 솔루션 최소한의 EDTA 함유. If EDTA has an impact on subsequent experiments, it is recommended to use sterile deionized water instead of Elution Buffer.

1. 샘플 처리:

ㅏ. Plant or Animal Tissues: Collect fresh tissues whenever possible. For plant and animal tissues, grind with liquid nitrogen, then quickly add 500μl of RNA Extraction Buffer II. 뒤집어서 잘 섞어주세요, avoiding tissue clumps in the lysate to prevent RNA degradation.

비. Cell Tissues: Collect fresh growing cells in a 1.5 ml centrifuge tube, 원심분리기 13,000 rpm 1 분, collect cells, 추가하다 500μl of RNA Extraction Buffer II, vortex and shake well.

2. 배양 장소56℃ for 1-3 분. If the sample has a high polysaccharide content, it is advisable to skip this step.

3. Vortex for 30 sec.

4. 용해물을 원심분리합니다. 10 min at 14,000 rpm (20,000×g).

(메모: Polysaccharides from plant materials may result in sticky substances at this step, which can cut DNA in subsequent steps. Remove these substances during this step. 원심분리 후, transfer the supernatant to a new DNA 정제 column.)

5. Add the obtained supernatant to the DNA cleanup column (매번 약 650-700μl), 원심분리기 이상 8,000 rpm 1 분, collect the filtrate (microRNA is in the filtrate at this point).
6. Estimate the volume of the filtrate accurately, 추가하다 0.5 times the volume of absolute ethanol. If there is a small amount of precipitation, it does not affect subsequent experiments. Add the liquid to the RNA purification column, 원심분리기 13,000 rpm 1 분.
7. Discard the waste and place the RNA purification column in a collection tube for the next step.
8. 추가하다 600억제제 제거 버퍼의 μl, 원심분리기 이상 8,000 rpm 1 분, 폐기물을 버리다, and place the RNA purification column back into the collection tube for the next step.
9. 추가하다 700세척 완충액의 μl 1 RNA 정제 컬럼으로, 원심분리기 14,000 rpm (20,000×g) ~을 위한 2 분, extend the centrifugation time appropriately to ensure a drier membrane.

(메모: Confirm the addition of absolute ethanol to Wash Buffer 1. The presence of ethanol has a severe impact on subsequent experiments. 그러므로, 막 건조가 중요합니다. 원심분리 후, ensure the absence of ethanol before elution, 폐기물을 버리다, and collect the tube.

After washing with Wash Buffer 1, RNA 정제 컬럼의 멤브레인은 약간의 색상만 있어야 합니다.. 원심분리 후, carefully remove the RNA purification column, ensuring it does not touch the collection tube to avoid ethanol interference.)

10. RNA 정제 컬럼을 새로운 원심분리기 튜브에 넣습니다., 추가하다 100용출 완충액 μl 막에, 실온에서 배양하다 5 분 (15℃ to 25℃), 원심분리기 이상 8,000 rpm 1 분.

(메모: Eluting RNA with 50μl of Elution Buffer can increase RNA concentration but decrease total RNA yield.)

11. 이전 단계를 반복하세요..

메모: A new centrifuge tube can be used to collect the RNA eluted the second time, or the original collection tube can be used to continue collecting RNA.