Solarbio ATP ADP AMP 함량 HPLC 분석 키트 50T | 48에스

메모: 테스트 전에 예측을 위해 2~3개의 서로 다른 샘플을 채취합니다.. 운영장비: 고성능 액체 크로마토 그래피 카탈로그 번호: BC5114

크기：50T/48S

구성요소:

추출액 I: 80 밀리리터×1. 2-8℃에서 보관.

추출액 II：40 밀리리터×1. 2-8℃에서 보관.

시약 I: 15 밀리리터×1. 2-8℃에서 보관. 사용하기 전에, 가져가다 3.5 mL의 시약 I을 첨가하고 1000 초순수 1mL, pH를 다음으로 조정한다 6.15 시약 II를 사용하여 이동상 B를 형성합니다., 그리고 봉인해.

시약 II:10 밀리리터 ×1. 2-8℃에서 보관.

ATP 표준： 가루×1. -20℃에서 보관. 사용하기 전에, 1.8 mL 증류수를 첨가하여 준비한다. 1 μmol / mL ATP 표준 용액, 에 얼었던 것 -20 ℃. ATP의 무결성을 보장하려면, 반복적인 동결과 해동을 피하십시오.

ADP 표준： 가루×1. -20℃에서 보관. 사용하기 전에, 2.34 mL 증류수를 첨가하여 준비한다. 1 μmol / mL ATP 표준 용액, 에 얼었던 것 -20 ℃. ATP의 무결성을 보장하려면, 반복적인 동결과 해동을 피하십시오.

AMP 표준： 가루×1. -20℃에서 보관. 사용하기 전에, 2.0 mL 증류수를 첨가하여 준비한다. 1 μmol / mL ATP 표준 용액, 에 얼었던 것 -20 ℃. ATP의 무결성을 보장하려면, 반복적인 동결과 해동을 피하십시오.

제품 설명：

뉴클레오티드는 중요한 생물학적 기능을 가지고 있습니다. 그들은 세 가지 물질로 구성된 화합물 종류입니다.: 퓨린 염기 또는 피리미딘 염기, 리보스 또는 디옥시리보스, 및 인산. 그들은 주로 뉴클레오시드 형성에 관여합니다..

아데노신 삼인산 (ATP) 모든 유기체의 생존과 번식에 있어서 세포합성에 필수적인 보편적인 에너지원으로 간주됩니다.. ATP는 다양한 세포 경로를 통해 생산될 수 있습니다.. 가장 대표적인 예는 미토콘드리아의 산화적 인산화를 통한 아데노신 삼인산 합성효소에 의한 합성이다., 또는 식물 엽록체의 광합성에 의한 합성. ATP 합성의 주요 에너지원은 포도당과 지방산입니다..

아데노신 이인산염 (ADP) 동물에 널리 존재, 식물, 미생물, 및 배양된 세포. 유기체에서, ADP는 고에너지 인산염 결합을 끊은 산물입니다. (ATP) 가수분해되어 인산염 라디칼을 잃음) 에너지를 방출하고.

아데노신 모노포스페이트 (앰프) 동물에게서 널리 발견된다, 식물, 미생물, 및 배양된 세포. ATP와 ADP가 체내에서 에너지를 방출한 후 형성됩니다.. 아데노신 이인산염을 형성하기 위해 인산염 그룹과 계속 결합할 수 있습니다. (ADP) 그리고 아데노신 삼인산 (ATP). ATP의 불완전 가수분해 산물이다..

ATP 、 ADP 、 AMP는 다음과 같은 흡수 피크를 갖습니다. 254 nm, 고성능 액체 크로마토그래피로 그 함량을 측정할 수 있습니다..

필요하지만 제공되지 않는 시약 및 장비：

고효율 액체 크로마토그래프 (C18 컬럼 (4.6×250mm), 자외선 검출기 (폭스바겐)), 데스크탑 원심분리기, 조절 가능한 피펫, 모르타르/균질화기, 갈색 EP 튜브, 50 주사기 필터 (물, 0.45

μm), 주사기, 흡입 필터, 필터 막 (본질적인, 물), 50 갈색 주사 병 (2 밀리리터), 아세토니트릴 (크로마토그래피적으로 순수한, 500 밀리리터), 초순수.

실험 전 준비:

1. 사용 500 크로마토그래피적으로 순수한 아세토니트릴 1mL (이동상 A) 그리고 1000 크로마토그래피 컬럼의 막힘을 방지하기 위해 용매의 불순물을 제거하기 위해 필터막으로 필터링하도록 구성된 이동상 B의 mL. (아세토니트릴은 0.45 흡입 여과용 µm 유기 필터 막, 구성된 이동상 B는 0.22 흡입 여과용 µm 수성 필터 멤브레인).
2. 준비된 이동상 A와 B를 초음파 검사합니다. 30 크로마토그래피 컬럼이 막히거나 실험에 영향을 미치는 것을 방지하기 위해 용매에서 가스를 제거하는 데 몇 분이 소요됩니다.
3. 준비중 인 ATP 표준: 1 μmol/mL ATP 표준 용액을 증류수로 희석하여 0.5 μmol/mL, 0.1 μmol/mL, 0.05 μmol/mL, 0.01 μmol/mL, 0.005 μmol/mL ATP 표준 용액. (준비된 표준 농도는 참고용이며 실제 시료 농도에 따라 조정될 수 있습니다.). 표준품을 수성 주사기 필터를 사용하여 갈색 주입병에 넣어 시험합니다. (테스트하기 전에 실온에 두십시오., 유지 시간에 영향을 미치지 않도록).
4. 준비중 인 ADP 표준: 1 μmol/mL ADP 표준용액을 증류수로 희석하여 0.5 μmol/mL, 0.1 μmol/mL, 0.05 μmol/mL, 0.01 μmol/mL, 0.005 μmol/mL ADP 표준 용액. (준비된 표준 농도는 참고용이며 실제 시료 농도에 따라 조정될 수 있습니다.). 표준품을 수성 주사기 필터를 사용하여 갈색 주입병에 넣어 시험합니다. (테스트하기 전에 실온에 두십시오., 유지 시간에 영향을 미치지 않도록).
5. 준비중 인 AMP 표준: 1 μmol/mL AMP 표준 용액을 증류수로 희석하여

0.5 μmol/mL, 0.1 μmol/mL, 0.05 μmol/mL, 0.01 μmol/mL, 0.005 μmol/mL AMP 표준 용액. (준비된 표준 농도는 참고용이며 실제 시료 농도에 따라 조정될 수 있습니다.). 표준품을 수성 주사기 필터를 사용하여 갈색 주입병에 넣어 시험합니다. (테스트하기 전에 실온에 두십시오., 유지 시간에 영향을 미치지 않도록).

절차

1. 샘플 준비:

• • 조직 샘플: 조직의 비율에 따라 (g): 추출액 I (밀리리터) = 1:5~10 (무게를 재는 것이 좋습니다 3 g 조직 샘플 및 추가 1.5 mL 추출물 용액 I) 추출액을 첨가하기 위해 I, 얼음 위에서 균질화하다, 그리고 얼음물에서 추출해서 40 분. 원심분리기 10000 rpm 10 4°C에서 최소, 상등액의 750μL를 취하십시오., 추출물 II 750μL 첨가, 잘 흔들어 (5 분) 그리고 잘 섞으세요, 다시 원심분리기를 놓는다 10000 4°C에서 rpm 10 분, 상등액을 수성 주사기 필터로 여과하여 갈색 주사병에 담아 실온에서 시험합니다. (이내에 2 시간).
  • 세포 샘플: 비율에 따르면 10 백만개의 세포 (단위): 추출액 I (밀리리터)= 1000~500:1 (복용하는 것이 좋습니다 10 백만 개의 세포 샘플을 추가하고 1 mL 추출물 용액 I) 추출 용액 추가 I, 얼음 위의 초음파 파괴 세포 (전력 300W, 초음파 3 초, 간격 7 초, 총 시간 3 분); 4℃에서 원심분리기, 10000 rpm 10 분, 상등액의 750μL를 취하십시오., 추출물 II 750μL 첨가, 잘 흔들어 (5 분) 그리고 잘 섞으세요, 다시 원심분리기를 놓는다 10000 4°C에서 rpm 10 분, 상등액을 수성 주사기 필터로 여과하여 갈색 주사병에 담아 실온에서 시험합니다. (2시간 이내).
  • 혈청: 복용하는 것이 좋습니다 0.4 mL 혈청 샘플, 추가하다 0.6 mL 추출 용액 1, 그리고 추출 40 얼음 욕조에 있는 분. 원심분리기 10000 rpm 10 4°C에서 최소, 상등액의 750μL를 취하십시오., 추출물 II 750μL 첨가, 잘 흔들어 (5 분) 그리고 잘 섞으세요, 다시 원심분리기를 놓는다 10000 4°C에서 rpm 10 분, 상등액을 수성 주사기 필터로 여과하여 갈색 주사병에 담아 실온에서 시험합니다. (2시간 이내).

2. 결정 절차：

1. 컴퓨터를 켜세요, HPLC 각 모듈의 스위치 버튼을 켭니다., 크로마토그래피 컬럼을 설치하다, 소프트웨어를 열어라, 분석법 그룹의 주입량을 10μL로 설정합니다., 컬럼 온도: 27℃, 유량 0.8 mL/분, 파장 254 nm, Elution 프로그램은 아래 표와 같습니다., 샘플링 시간은 70 분. 설정 후, 메소드 그룹 저장.
2. 이동상으로 컬럼을 청소합니다., 아세토니트릴의 이동상 비율로 컬럼을 평형화합니다.: 이동상 B (pH = 6.15) = 2: 98, 베이스라인이 안정된 후 주입을 시작합니다..
3. 준비된 표준용액을 검출, 주입량은 10 µL, ATP, ADP, AMP는 다음과 같이 분리될 수 있습니다. 10 분, ATP의 유지 시간, ADP, AMP는 대략 7.8 분, 6.7분과 5.4분 (시스템의 pH, 열, 이동상, 등. 다르다, 유지시간이 달라요, 참고용).
4. 준비된 샘플 솔루션을 감지, 주입량은 10 µL, ATP의 피크 면적을 검출합니다., ADP, 해당 보존 기간의 AMP

3. 계산：

1. ATP의 표준곡선 그리기, ADP, 표준 농도의 AMP (μmol/mL) x로, 피크 면적을 y로. 샘플의 피크 면적을 표준 곡선에 대입하여 ATP를 계산합니다., ADP, AMP 농도 x1, x2, x3 (μmol/mL) 에서

ATP 내용 계산

1. 샘플 중량

ATP (μmol/g)=2 x1×VE ¼ W=3 x 1 ¼ W

ATP (μg/g)=2 x1 ×VE×551.14 ¼W=1653.42 x1¼W

VE: 추출 용액의 부피 I, 1.5밀리리터; 여: 샘플 중량, g; MATP: 551.14; 2: 샘플 희석 인자.

1. 액체량:

ATP (μmol/mL)=2 x1 ×VE ¼VS=5×x1

ATP (μg/mL)=2 x1 ×VE×551.14 ¼VS =2755.7 ×x1

VE: 추출 용액의 부피 I, 1밀리리터; MATP: 551.14; VS： 샘플의 양, 0.4밀리리터； 2: 샘플 희석 인자.

1. 셀량

ATP (μmol/104셀)=2 x1 ×VE ¼ N =2×x1 ¼ N

ATP (μg/g104 세포)=2 x1 ×VE×551.14 ¼N =1102.28×x1¼N

VE: 추출 용액의 부피 I, 1밀리리터; MATP: 551.14; N: 셀 수, 104 단위로; 2: 샘플 희석 인자.

ADP 콘텐츠 계산

1. 샘플 중량

ADP (μmol/g)=2 x2×VE ¼ W=3 x 2 ¼ W

ADP (μg/g)=2 x2 ×VE×427.2 ¼W=1281.6 x2¼W

VE: 추출 용액의 부피 I, 1.5밀리리터; 여: 샘플 중량, g; MADP: 427.2; 2: 샘플 희석 인자.

1. 액체량:

ADP (μmol/mL)=2 x2 ×VE ¼VS=5×2

ADP (μg/mL)=2 x2 ×VE×427.2¼VS =2136×x2

VE: 추출 용액의 부피 I, 1밀리리터; MADP: 427.2; VS： 샘플의 양, 0.4밀리리터； 2: 샘플 희석 인자.

1. 셀량

ADP (μmol/104셀)=2 x2 ×VE ¼ N =0.002 × 2 ¼ N

ADP (μg/g104 세포)=2 x2 ×VE×427.2 ¼N =854.4×x2¼N

VE: 추출 용액의 부피 I, 1밀리리터; MADP: 427.2; N: 셀 수, 104 단위로; 2: 샘플 희석 인자.

AMP 콘텐츠 계산

1. 샘플 중량

앰프 (μmol/g)=2 x3×VE ¼ W=3 x 3 ¼ W

앰프 (μg/g)=2 x3 ×VE×499.19 ¼W=1497.57×3¼W

VE: 추출 용액의 부피 I, 1.5밀리리터; 여: 샘플 중량, g; MAMP: 499.19; 2: 샘플 희석 인자.

1. 액체량:

앰프 (μmol/mL)=2 x3 ×VE ¼VS=5×x3

앰프 (μg/mL)=2 x3 ×VE×499.19¼VS =2495.95×x3

VE: 추출 용액의 부피 I, 1밀리리터; MAMP: 499.19; VS： 샘플의 양, 0.4밀리리터； 2: 샘플 희석 인자.

1. 셀량

앰프 (μmol/104셀)=2 x3 ×VE²N =2×x3²N

앰프 (μg/g104 세포)=2 x3 ×VE×499.19 ¼N =998.38×x3¼N

VE: 추출 용액의 부피 I, 1밀리리터; MAMP: 499.19; N: 셀 수, 104 단위로; 2: 샘플 희석 인자.

메모:

지침:

1. 감지 후, 크로마토그래피 컬럼은 고농도 초순수로 세척되어야 합니다. (~에 대한 20-30 컬럼 볼륨) 크로마토그래피 컬럼이 막히는 것을 방지하기 위해. 마지막으로, 크로마토그래피의 손상을 방지하려면 컬럼 사양에 따라 컬럼을 세척하십시오.
2. 표준물질의 희석배수는 시료의 뉴클레오티드 농도에 따라 결정되어야 합니다.. 검체 내 뉴클레오티드의 피크 면적은 서로 다른 농도의 표준 용액의 피크 면적 내에 있어야 합니다.. 표준품의 희석배수는 참고사항일 뿐입니다.. 검체 내 뉴클레오티드 농도가 너무 높은 경우, 전에 희석하는 것이 좋습니다
3. 추출 후 시료는 실온에서 안정하지 않습니다., 그러니 가능한 한 빨리 수술을 해야 해요.
4. 표본수가 너무 많은 경우, 하루에 한 번 표준 용액을 테스트하는 것이 좋습니다. (하나의 표준 용액으로 충분합니다) 해당 보존을 결정하기 위해